文档文本内容
课时2 赋予生物新的遗传特性的基因工程
重点1 基因工程和蛋白质工程
【知识盘查】
1.归纳基因工程的基本工具
提醒 若用不同的限制
切割出不同的黏性末端，能使目的基因和
体定向
酶
则
载
连
接，避免自身
化和反向
接，提高
接的有效性。
环
连
连
2.理解掌握基因工程的操作步骤
(1)目的基因的筛选与获取
(2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建
提醒 ①启
子和
止子：启
子
动
终
动
(DNA 片段)≠起始密
子
码
(位于mRNA 上)；终
止子(DNA 片段)≠
止密
子
终
码
(位于mRNA)上。
②目的基因插入位置：启
子与
止子之
。
动
终
间
③利用乳腺生物反
器生
物
，将目的基因与乳腺中特异表达的基因的启
应
产药
时应
子等
控元件重
在一起。
动
调
组
(3)将目的基因导入受体细胞
(4)目的基因的检测与鉴定
提醒 PCR 技
不
可用于
取和
增目的基因，
能用于
受体
胞中是
术
仅
获
扩
还
检测
细
否含有目的基因或受体
胞中的目的基因是否
出
细
转录
mRNA。
3.图示法解读蛋白质工程
【曾经这样考】
1.(2024·江西卷，12)γ－氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L－谷氨
酸脱羧酶(GadB)催化L－谷氨酸脱羧是高效生产γ－氨基丁酸的重要途径之一。
研究人员采用如下图方法将酿酒酵母S 的L－谷氨酸脱羧酶基因(gadB)导入生产
菌株E.coliA，构建了以L－谷氨酸钠为底物高效生产γ－氨基丁酸的菌株
E.coliB。下列叙述正确的是( )
A.图中表明，可以从酿酒酵母S 中分离得到目的基因gadB
B.E.coliB 发酵生产γ－氨基丁酸时，L－谷氨酸钠的作用是供能
C.E.coliA 和E.coliB 都能高效降解γ－氨基丁酸
D.可以用其他酶替代NcoⅠ和Kpn Ⅰ构建重组质粒
答案 A
解析 分析
意，可以从
酒酵母
题
酿
S 中
、分离出目的基因
筛选
gadB，然后利用
PCR
增目的基因，
扩
A 正确；由
意知，
题
L－谷氨酸
是生
钠
产γ－氨基丁酸的底物，
不能用来供能，B
；将目的基因
错误
(gadB)
入菌株
导
E.coliA 构建高效生产γ－氨
基丁酸的菌株E.coliB，E.coliA 和E.coliB 均不能高效降解γ－氨基丁酸，C
；
错误
根据
干提供的信息，无法推断出
题
是否有其他
能
替代
酶
够
NcoⅠ和KpnⅠ，D 错
。
误
2.(2023·重
卷，
庆
12)某小组通过PCR(假设引物长度为8 个碱基，短于实际长度)获
得了含有目的基因的DNA 片段，并用限制酶进行酶切(如下图)，再用所得片段成
功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是( )
A.实验所用引物，其中一个序列为5′－TGCGCAGT－3′
B.步骤①所用酶是SpeⅠ和CfoⅠ
C.用步骤①的酶对载体进行酶切至少获得了2 个片段
D.酶切片段和载体连接时可使用E.coli DNA 连接酶或T4 DNA 连接酶
答案 B
解析 根据
增所得
扩
DNA 片段可知，
所用的两种引物序列
实验
为5′－
TGCGCAGT－3′和5′－AGCTAGCA－3′，A 正确；根据
切后得到的黏性末端判
酶
断，步骤①所用
是
酶
NheⅠ和CfoⅠ，B
；步
错误
骤①用两种
切割
体
酶
载
(
粒
质
)，质
粒上至少有两个切口，至少
生
产
2 个片段，C 正确；目的基因片段和
粒
切后
质
经酶
生的均
黏性末端，可用
产
为
E.coli DNA
接
或
连
酶
T4 DNA
接
接，
连
酶连
D 正确。
3.(2024·湖南卷，21)百合具有观赏、食用和药用等多种价值，科研人员对其进行了
多种育种技术研究。回答下列问题：
(1)体细胞杂交育种。进行不同种百合体细胞杂交前，先用________去除细胞壁获
得原生质体，使原生质体融合，得到杂种细胞后，继续培养，常用________(填植
物激素名称)诱导愈伤组织形成和分化，获得完整的杂种植株。
(2)单倍体育种。常用____________的方法来获得单倍体植株，鉴定百合单倍体植
株的方法是________________________________________________________
__________________________________________________________________。
(3)基因工程育种。研究人员从野生百合中获得一个抵抗尖孢镰刀菌侵染的基因
pL，该基因及其上游的启动子pL 和下游的终止子结构如图a。图b 是一种Ti 质粒
的结构示意图，其中基因gus 编码GUS 酶，GUS 酶活性可反映启动子活性。
①研究病原微生物对L 的启动子pL 活性的影响。从图a 所示结构中获取L，首先
选用____________酶切，将其与相同限制酶酶切的Ti 质粒连接，再导入烟草。随
机选取3 组转基因成功的烟草(P1、P2 和P3)进行病原微生物胁迫，结果如图c。由
此可知：三种病原微生物都能诱导pL 的活性增强，其中________的诱导作用最
强。
②现发现栽培种百合B 中也有L，但其上游的启动子与野生百合不同，且抗病性
弱。若要提高该百合中L 的表达量，培育具有高抗病原微生物能力的百合新品种，
简要写出实验思路_________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________。
答案 (1)纤维素酶和果胶酶 生长素和细胞分裂素
(2)花药(或花粉)离体培养 利用显微镜观察根尖有丝分裂中期细胞中染色体的
数目
(3)①HindⅢ、BamHⅠ 交链格孢 ②利用转基因技术将百合B 中L 基因的启动
子替换为野生百合中L 基因的启动子pL
解析 (1)因植物
胞
胞壁的成分主要是
素和果胶，因此
得原生
体的
细
细
纤维
获
质
方法是用
素
和果胶
植物
胞
行
理，得到原生
体后使原生
体融
纤维
酶
酶对
细
进
处
质
质
合，形成
种
胞，再用生
素和
胞分裂素
愈
形成和分化，从而
杂
细
长
细
诱导
伤组织
获
得完整的
种植株。
杂
(2)
得
倍体植株的常用方法是花
获
单
药(花粉)离体培养；
定
鉴
百合
倍体植株的方法是利用
微
察根尖有
分裂中期
胞中染色体的数
单
显
镜观
丝
细
目，如果染色体数目减少一半，
得的植株
则获
倍体植株。
为单
(3)①根据目的片段
以及
粒上限制
的
位点，若要
得
质
酶
识别
获
pL 并
接到
粒上，可
用限制
连
质
选
酶
HindⅢ、BamHⅠ
行
切，以替
进
酶
换Ti
粒中的启
子，从而达到根据
质
动
GUS
活
酶
性反映启
子活性的目的。根据
动
图c 的
果可知，交
格
的每一
基因烟草
结
链
孢
组转
中的GUS
活性都最高可确定其
作用最
。
酶
诱导
强
②欲培育具有高抗病原微生物
百合新品种，可利用
基因技
将百合
转
术
B 中L 基因的启
子替
野生百合中
动
换为
L
基因的启
子
动
pL。
【还会这样考】
1.(2024·山
日照二模
东
)反向PCR 是利用已知序列设计引物对未知序列进行扩增
的技术，其过程如下图。下列叙述错误的是( )
A.过程①可用同种限制酶切割磷酸和脱氧核糖之间的磷酸二酯键
B.过程②需用DNA 连接酶将酶切片段环化以实现对未知序列的扩增
C.过程③需添加方向相对的引物1 和3 以便DNA 聚合酶从其3′端延伸子链
D.过程③中将温度调至72 ℃的目的是使引物与模板链通过碱基互补配对结合
答案 D
解析
程
过
①即
切后，已知序列能
化，
明两端的黏性末端相同，可用同一
酶
环
说
种限制
未知序列两端
行切割，
酶对
进
A 正确；程
过
②即
化，
程中使用
环
该过
DNA
接
催化相
核苷酸之
形成磷酸二
，
连
酶
邻
间
酯键
B 正确；
程
过
③
增，需添加方
为扩
向相
的引物
对
1 和3 以便DNA 聚合
从其
酶
3′端延伸子
，
链C 正确；程
过
③中将温
度
至
调
72 ℃的目的是在耐高温的DNA 聚合
作用下，将四种脱氧核苷酸根据碱
酶
基互
配
原
合成新的
补
对
则
DNA
，
链
D
。
错误
2.(2024·山
庄二模
东枣
)DNA 的双链中，转录时作为模板功能的链叫作反义链，另
一条叫作有义链。下图是DNA 分子中某些基因有义链和反义链示意图。下列说
法错误的是( )
A.根据启动子和终止子的相对位置可以判断哪条链作为反义链
B.不同的基因可能同时复制，也可能同时转录
C.DNA 分子的一条链对不同基因来说，有的是有义链，有的是反义链
D.基因的转录和翻译都是沿着模板的3′端到5′端进行的
答案 D
解析 启
子的作用是
动
RNA 聚合
和
合的位点，
基因
，因此根
酶识别
结
驱动
转录
据启
子和
止子的相
位置可以判断哪条
作
反
，
动
终
对
链
为
义链
A 正确；不同的基因
位置不同，可能同
复制，也可能同
，
时
时转录B 正确；不同基因的有
和反
义链
义链
不同，因此DNA 分子的一条
不同基因来
，有的是有
，有的是反
，
链对
说
义链
义链C
正确；基因的
是沿着模板的
转录
3′端到5′端
行的，翻
是沿着模板的
进
译
5′端到3′
端
行的，
进
D
。
错误
3.(2024·天津河西二模)筛选出能与SARS 病毒的S 蛋白特异性结合的受体蛋白，
研究人员在S 蛋白末端添加TAP 标签(能特异性地与人和哺乳动物体内IgG 类抗
体结合)，再利用该标签在病毒敏感细胞(如非洲绿猴肾细胞)中快速纯化出S 蛋白
及其相互作用的蛋白质，具体过程如下图。其中Xho Ⅰ、SmaⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ
表示限制酶，pCMV、T7 表示启动子，Kozak 序列是翻译起始因子结合位点的编
码序列，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，ori 表示复制原点。请回答问题：
(1)为成功构建重组质粒pcDNA 3.1－S－TAP，在利用PCR 扩增S 基因时，应在S
基因的5′端引入________，3′端删除________的编码序列。
(2)将S 基因和TAP 序列的扩增产物进行________鉴定，结果显示两个片段均得
到扩增且与预期值大小相一致。再经测序证实正确后，将这两个片段经限制酶切
割并通过________酶连接定向克隆入质粒pcDNA 3.1。
(3)重组质粒pcDNA 3.1－S－TAP 转染细胞前，需将vero 细胞置于37 ℃、
________________(填气体条件)下培养18～24 h 进行传代。将传代的细胞与重组
质粒pcDNA 3.1－S－TAP 以适宜比例混合，在转染试剂的作用下转染细胞(实验
组) ，为保证实验的科学性，还需设置对照实验，具体做法为
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________。
将转染24 h 的细胞置于载玻片，洗涤、固定后滴加正常人血清稀释液和荧光素标
记的羊抗人IgG 抗体稀释液，荧光显微镜下观察，若________________，则说明S
－TAP 融合蛋白在vero 细胞中得以表达。
(4)通过上述检测发现，S－TAP 融合蛋白表达量较低，其原因可能有________(填
序号)。
①重组质粒pcDNA 3.1－S－TAP 在vero 细胞中大量复制
②S－TAP 融合基因在vero 细胞中转录出的mRNA 量较少
③S 基因与病毒宿主细胞的基因有不同的密码子偏爱性，翻译相应mRNA 的
tRNA 数量不足
答案 (1)Kozak 序列和SmaⅠ识别序列 终止密码子
(2)琼脂糖凝胶电泳 DNA 连接
(3)95%空气＋5%CO2 使用pcDNA 3.1 空载体转染细胞，其余操作相同 出现荧
光标记
(4)②③
解析 (1)Kozak 序列是翻
起始因子
合位点的
序列，根据构建的重
粒
译
结
编码
组质
示可分析，在
图
S 基因的上游加入了Kozak 序列；
了使目的基因和
粒
接，
为
质
连
根据启
子的方向、粒上的
切位点可知，上游不能用
动
质
酶
XhoⅠ，故
在
应
S 基因的
上游加入SmaⅠ
序列；因
识别
为S 基因和TAP 序列需要同步表达才能利用TAP
作为S 蛋白的
，二者共用一个启
子，故
去除
标签
动
应
S 基因下游的
止密
子的
终
码
序列
编码
。(2)将S 基因和TAP 序列的
增
物
行
脂糖凝胶
泳
定，果
扩
产
进
琼
电
鉴
结
显
示两个片段均得到
增且与
期
大小相一致。
扩
预
值
DNA
接
可将限制
切割后
连
酶
酶
形成的末端
接。
连
(3)
物
胞培养的气体条件是
动
细
95%的空气和5%的CO2。
照
对
是
了排除空
粒的影响，故
使用
组
为
质
应
pcDNA 3.1 空
体
染
胞，其余操作相
载
转
细
同。将
染
转
24 h 的
胞置于
玻片，洗
、固定后滴加正常人血清稀
液和
光
细
载
涤
释
荧
素
的羊抗人
标记
IgG 抗体稀
液，光
微
下
察，若出
光
，
明
释
荧
显
镜
观
现荧
标记则说
S
－TAP 融合蛋白在vero
胞中得以表达，
光素
的羊抗人
细
荧
标记
IgG 抗体才能够
与TAP
合
出
光。
标签结
发
荧
(4)蛋白
表达要
和翻
两个
程，
质
经过转录
译
过
①重组质
粒pcDNA 3.1－S－TAP 在vero
胞中大量复制，与蛋白表达量
低无关，
细
较
①错
；
误
②S－TAP 融合基因在vero
胞中
出的
细
转录
mRNA 量
少，模板少，影响翻
较
出的蛋白
含量，
译
质
②正确；③tRNA 在翻
程中起到
运氨基酸的作用，
译过
转
tRNA 数量不足影响翻
的
行，
译
进
③正确，故选②③。
重点2 PCR 技术及应用
【知识盘查】
1.PCR 技术原理与条件
2.PCR 技术的过程
提醒 可通
引物控制
过
PCR
增的基因片段，并在基因两
引入限制
序
扩
侧
酶识别
列。
3.DNA 的粗提取与鉴定
4.DNA 片段的电泳鉴定
【曾经这样考】
1.(2024·山
卷，
东
13)关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是(
)
A.整个提取过程中可以不使用离心机
B.研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中
C.鉴定过程中DNA 双螺旋结构不发生改变
D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰
答案 A
解析 在DNA 的粗提取与
定
中，可将
得的研磨液用
布
后，在
鉴
实验
获
纱
过滤
4
℃的冰箱中放置几分
，再取上清液倒入
杯，也可以直接将研磨液用离心机
钟
烧
进
行离心后取上清液，A 正确；研磨液在4 ℃冰箱中放置几分
后，
钟
DNA 在上清液
中，将上清液倒入
杯中，
应
烧
B
；定
程中用沸水浴加
，
错误鉴
过
热DNA 双螺旋
构
结
会
生改
，
发
变C
；加入二苯胺
后沸水浴
理的
要在
错误
试剂
处
时间
5 分
以上，且要
钟
等到冷却后再
察
果，
才可以
察到
明
的
色反
，
置一个加
观
结
这样
观
较为
显
显
应
仅设
二苯胺不加DNA 的
照
可以
对
组
排除二苯胺加
后可能
的干
，
热
变蓝
扰
D
。
错误
2.(不定项)(2024·湖南卷，15)最早的双脱氧测序法是在PCR 反应体系中，分别再
加入一种少量的双脱氧核苷三磷酸(ddATP、ddCTP、ddGTP 或ddTTP)，子链延伸
时，双脱氧核苷三磷酸也遵循碱基互补配对原则，以加入 ddATP 的体系为例：若
配对的为ddATP，延伸终止；若配对的为脱氧腺苷三磷酸(dATP)，继续延伸；PCR
产物变性后电泳检测。通过该方法测序某疾病患者及对照个体的一段序列，结果
如图所示。下列叙述正确的是( )
A.上述PCR 反应体系中只加入一种引物
B.电泳时产物的片段越小，迁移速率越慢
C.5′－CTACCCGTGAT－3′为对照个体的一段序列
D.患者该段序列中某位点的碱基C 突变为G
答案 AC
解析 利用双脱氧
序法
，
测
时
PCR 反
体系中加入的模板
应
是待
的
测
单链DNA，
故只需加入一种引物，A 正确；泳
，物的片段越大，迁移速率越慢，
电
时产
B
；
错误
照
的
序
果
对
组
测
结
为5′—CTACCCGTGAT—3′ ，患者的
序
果
测
结
为5′—
CTACCTGTGAT—3′，比可知，患者
段序列中某位点的碱基
对
该
C 突变为T，C 正
确，D
。
错误
3.(2023·江
卷，
苏
22)为了将某纳米抗体和绿色荧光蛋白基因融合表达，运用重组
酶技术构建质粒，如图1 所示。请回答下列问题：
(1)分别进行PCR 扩增片段F1 与片段F2 时，配制的两个反应体系中不同的有
________，扩增程序中最主要的不同是________。
(2)有关基因序列如图2。引物F2－F、F1－R 应在下列选项中选用________。
EGFP 基因序列：5′ATGGTGAGCAAGGGC—GACGAGCTGTACAAG3′
AnB1 基因序列：5′CATGTCCAGCTGCAG—CCAAAACCACAACCA3′
图2
A.ATGGTG——CAACCA
B.TGGTTG——CACCAT
C.GACGAG——CTGCAG
D.CTGCAG——CTCGTC
(3)将PCR 产物片段与线性质粒载体混合后，在重组酶作用下可形成环化质粒，
直接用于转化细菌。这一过程与传统重组质粒构建过程相比，无需使用的酶主要
有________。
(4)转化后的大肠杆菌需采用含有抗生素的培养基筛选，下列叙述错误的有
________。
A.稀释涂布平板需控制每个平板30～300 个菌落
B.抗性平板上未长出菌落的原因一般是培养基温度太高
C.抗性平板上常常会出现大量杂菌形成的菌落
D.抗性平板上长出的单菌落无需进一步划线纯化
(5)为了验证平板上菌落中的质粒是否符合设计，用不同菌落的质粒为模板，用引
物F1－F 和F2－R 进行了PCR 扩增，质粒P1～P4 的扩增产物电泳结果如图3。
根据图中结果判断，可以舍弃的质粒有________。
(6)对于PCR 产物电泳结果符合预期的质粒，通常需进一步通过基因测序确认，
原因是____________________________________________________________
__________________________________________________________________。
答案 (1)模板、引物 复性温度 (2)CD (3)限制性内切核酸酶、DNA 连接酶
(4)ABC (5)P3、P4 (6)琼脂糖凝胶电泳技术仅能用于分析待检测DNA 分子的
大小，无法确定待检测DNA 分子的碱基序列
解析 (1)PCR 反
行的条件：引物、
、
应进
酶
4 种脱氧核苷酸、模板和
冲液
缓
(其中
需要Mg2＋)。分
行
别进
PCR
增片段
扩
F1 与片段F2
，配制的两个反
体系中不
时
应
同的有模板(片段F1、片段F2)、引物。增程序中恰当地
复性温度，尽量避免
扩
选择
引物与模板的非特异性
合，以保
目的
物的有效
增。
结
证
产
扩
(2)由图1 可知，F2－F
与F1－R 互
，因此
中
补
选项
A、B 一
，
组C、D 一
，再由
组
图1 可知，F2－F 与F 片
段(EGFP 基因序列3′端)部分相同，与F2 片段(AnB1 基因序列5′端)部分互
，即
补
C 项“ GACGAG” 与EGFP 基因的“ 5′GACGAG3′” 同，“ 5′CTGCAG3′” 与
AnB1 基因序列的“5′CTGCAG3′”互
，
补
F1－R 与F2 片段(AnB1 基因序列5′端)
部分相同，与F1 片段(EGFP 基因序列3′端)部分互
，即
补
D
符合。
项
(3)
重
传统
组
粒构建需要使用限制性内切核酸
质
酶(限制酶)切割
粒使其具有与目的基因相
质
同的黏性末端，之后再用DNA
接
将目的基因和
粒
接成重
粒。
干
连
酶
质
连
组质
题
将PCR
物片段与
性
粒
体混合后，在重
的作用下可形成
化
粒，不
产
线
质
载
组酶
环
质
需要使用限制性内切核酸酶(限制酶)和DNA
接
。
连
酶
(4)用稀
涂布平板法培养
释
数
，
了使
果更准确，
有
计
时
为
结
应选择
30～300 个菌落数的平板，但
不
筛选时
需
控制数目，A
；培养基温度太高将接种的菌落
死，会
致抗性平板上未
错误
杀
导
长
出菌落，属于操作失
，不是一般原因，
误
B
；化后的大
杆菌需采用含有抗
错误转
肠
生素的培养基
，一般含有重
粒的大
杆菌才能
展
菌落，故不会出
筛选
组质
肠
发
为
现
大量
菌形成的菌落，
杂
C
；稀
涂布平板法和平板划
法均
分离
化
菌
错误
释
线
为
纯
细
的方法，用稀
涂布平板法在抗性平板上
出的
菌落无需
一步划
化，
释
长
单
进
线纯
D
正确。(5)EGFP 为720 bp，AnB1 为390 bp，二者的总大小为720＋390＝1
110(bp)，用引物F1－F 和F2－R
行了
进
PCR
增其大小接近于
扩
P1、P2，根据
中
图
果判断，可以舍弃的
粒有
结
质
P3、P4。(6)
脂糖凝胶
泳技
能用于分析待
琼
电
术仅
检
测DNA 分子的大小，无法确定待检测DNA 分子的碱基序列，因此
于
对
PCR
物
产
泳
果符合
期的
粒，通常需
一步通
基因
序确
。
电
结
预
质
进
过
测
认
4.(2024·山
卷，
东
25)研究发现基因L 能够通过脱落酸信号途径调控大豆的逆境响
应。利用基因工程技术编辑基因L，可培育耐盐碱大豆品系。在载体上的限制酶
BsaⅠ切点处插入大豆基因L 的向导DNA 序列，将载体导入大豆细胞后，其转录
产物可引导核酸酶特异性结合基因组上的目标序列并发挥作用。载体信息、目标
基因L 部分序列及相关结果等如图所示。
图甲：载体信息
LB/RB：T－DNA 的边界序列；Kanr：卡那霉素抗性基因；Ampr：氨苄青霉素抗性
基因
图乙：目标基因L 部分序列
图丙：限制酶识别序列、切割位点及电泳结果
(1)用PCR 技术从大豆基因组DNA 中扩增目标基因L 时，所用的引物越短，引物
特异性越________(填“高”或“低”)。限制酶在切开DNA 双链时，形成的单链
突出末端为黏性末端，若用BsaⅠ酶切大豆基因组DNA，理论上可产生的黏性末
端最多有________种。载体信息如图甲所示，经BsaⅠ酶切后，载体上保留的黏
性末端序列应为5′—________—3′和5′—________—3′。
(2)重组载体通过农杆菌导入大豆细胞，使用抗生素________筛选到具有该抗生
素抗性的植株①～④。为了鉴定基因编辑是否成功，以上述抗性植株的DNA 为
模板，通过PCR 扩增目标基因L，部分序列信息及可选用的酶切位点如图乙所示
PCR 产物完全酶切后的电泳结果如图丙所示。据图可判断选用的限制酶是
________，其中纯合的突变植株是________(填序号)。
(3)实验中获得1 株基因L 成功突变的纯合植株，该植株具有抗生素抗性，检测发
现其体细胞中只有1 条染色体有T－DNA 插入。用抗生素筛选这个植株的自交
子代，其中突变位点纯合且对抗生素敏感的植株所占比例为________，筛选出的
敏感植株可用于后续的品种选育。
答案 (1)低 44(或256) GTTT CAAT
(2)卡那霉素 SacⅠ ④
(3)1/4
解析 (1)引物的
短会影响其在
长
目标DNA 序列上的
合能力和特异性。引物
结
过
短可能
致非特异性
增，即引物可能会
合到与目
序列不完全匹配或无关的
导
扩
结
标
DNA 上，
而
致非特异性
物的形成，影响
进
导
产
PCR 的特异性和准确性。
甲：
体信息
图
载
(2)分析
体信息可知，卡那霉素抗性基因位于
载
T－DNA 上，故重
体中含有卡
组载
那霉素抗性基因，重
体通
杆菌
入大豆
胞，使用抗生素卡那霉素可
组载
过农
导
细
筛
到具有
抗生素抗性的植株。
选
该
乙：目
基因
图
标
L 部分序列
丙：限制
序列、切割位点及
泳
果
图
酶识别
电
结
(3)
基因
设
L 突
基因
变为
L′，
株基因
则该
L 成功突
的
合植株的基因型
变
纯
为L′L′，
由
中信息可知，一条染色体插入了
题
T－DNA，若其插入了L′所在染色体，其所
在染色体记为L′1，
其自交子代的基因型及比例
则
为L′1L′1∶L′1L′∶L′L′＝
1∶2∶1。若用抗生素
个植株的自交子代，
出来的子代中突
位点
筛选这
筛选
变
纯
合且
抗生素敏感的植株
对
(L′L′)所占的比例为1/4。若其插入了其他染色体，所得
果相同。
结
【还会这样考】
1.(2024·山
泰安三模
东
)PCR 体系中加入的物质都会影响DNA 的扩增，不同阶段
的温度设置也会对产物的形成产生直接影响。下列叙述错误的是( )
A.若a 个DNA 扩增n 次，需要的引物数量至少是a(2n＋1－2)
B.不同引物之间、引物自身的片段不能互补配对
C.引物中G 和C 的含量会影响复性时引物与模板链的正常结合
D.PCR 反应体系中共需加入DNA 模板、2 种引物、耐高温的DNA 聚合酶三类物
质
答案 D
解析 1 个DNA
增
扩
n 次后，共有2n＋1条DNA
，其中有两条是母
，
链
链n 次复制
形成子
共需要引物数量
链
为(2n＋1－2)，若a 个DNA
增
扩
n 次，需要的引物数量至
少是a(2n＋1－2)，A 正确；不同引物
、引物自身的片段不能互
配
，否
会影
间
补
对
则
响
增出的
扩
DNA 数量或
度，
长
B 正确；引物中的G 和C 与母
形成一个碱基
链
对
的
数
氢键
为3 个，A 和T 间为2 个，G 和C 含量会影响复性
引物与模板
的
时
链
结
合，C 正确；PCR 反
体系中需加入
应
DNA 模板、2 种引物、耐高温的DNA 聚合酶
及4 种脱氧核苷酸四
物
，
类
质
D
。
错误
2.(2024·山
青
一模
东
岛
)“DNA 粗提取与鉴定”的实验步骤是：研磨→去杂质→
析出→鉴定；某研究小组欲探究不同的去杂质方法对实验结果的影响，实验结果
如下表所示。下列说法错误的是( )
去杂质方式
沉淀质
量/g
DNA 浓度/(ng·μL－
1)
OD260/OD280
二苯胺
鉴定
离心
0.068
81.5
1.53
蓝色
4 ℃冰箱静置
0.102 8
336.4
1.41
注：OD260与OD280的比
可
值
检查DNA
度。
纯
纯DNA 的OD260/OD280为1.8，当存在
蛋白
染
，
一比
会明
降低。
质污
时
这
值
显
A.猪肝和菜花均可作为提取DNA 的材料
B.对研磨液进行离心是为了加速DNA 的沉淀
C.离心法可以获得更高纯度的DNA
D.析出时的离心转速明显高于去杂质时
答案 B
解析 猪肝和菜花富含DNA，均可作
提取
为
DNA 的材料，A 正确；离心研磨液的
目的是加速沉淀，离心能
加速
胞膜、胞器、一些
大
的沉淀，
够
细
细
较
杂质
B
；
错误
由表可知，离心法OD260/OD280为1.53，静置OD260/OD280为1.41，当存在蛋白质污
染
，
一比
明
降低，
离心法的
时
这
值
显
则
DNA
度更高，
纯
C 正确；析出
析出
时为
DNA，
量比
，
需更高的
速，
质
杂质轻
则
转
D 正确。
3.(2024·山
淄博二模
东
)dNTP(包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP)的结构与ATP 类似，
除碱基不同外，dNTP 含有脱氧核糖。与dNTP 相比，ddNTP 的五碳糖为双脱氧核
糖，其3′碳位为－H 且不能与磷酸形成化学键。现有甲～丁四个PCR 反应体系，
甲体系中含有放射性磷标记的ddATP(记作ddATP＋)和DNA 模板链。PCR 完成后
经电泳(分子量小的DNA 在电场中移动快)将甲体系中一组长度不等的DNA 单
链分离。丙、乙、丁三个PCR 体系与甲相似，分别用于检测T、C、G 的碱基序列，
检测结果如图。下列说法正确的是( )
A.ddATP＋中的放射性磷酸基团应位于ddATP 的末端
B.甲体系中除含ddATP＋外，还应含有dTTP、dGTP、dCTP
C.新掺入脱氧核苷酸通过磷酸二酯键连接在子链的5′端
D.模板DNA 的碱基序列为3′CTGGACTGACAT5′
答案 D
解析 由于ddNTP 的五碳糖
双脱氧核糖，其
为
3′端碳位
－
为
H 且不能与磷酸形
成化学
，因此
键
ddATP＋中的放射性磷酸基
不
位于
团
应
ddATP 的末端，A
；甲
错误
体系中除含ddATP＋外，
含有
还应
dATP、dTTP、dGTP、dCTP，B
；
错误PCR
增
扩
时，
由5′端向3′端延伸，
新
入脱氧核苷酸通
磷酸二
接在子
的
则
掺
过
酯键连
链
3′端，C
；当
错误
ddNTP
合
，
结
时
DNA 合成
止，因此
终
DNA 合成
可能随机停止在任何
链
碱基
，根据四种碱
处
基的条
位置反向推出
带
DNA 序列。PCR
增
，由
扩
时
5′端向3′
端延伸，根据
泳
及分子量小的
则
电
图
DNA 在
中移
快可知，
电场
动
该DNA 片段的
待
碱基序列
测
为5′GACCTGACTGTA3′ ，因此模板DNA 的碱基序列为
3′CTGGACTGACAT5′，D 正确。
4.(不定项)(2024·山
泰安一模
东
)融合PCR 技术采用具有互补末端的引物，形成具
有重叠链的PCR 产物，通过PCR 产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意
DNA 片段连接起来。其原理如图所示，据图分析正确的是( )
A.上述过程中使用的引物P2 和P3 的碱基需要完全互补配对
B.设计引物的目的是为了能够从其3′端开始连接脱氧核苷酸
C.融合PCR 的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物
D.若融合PCR 的第三步获得128 个融合基因，理论上该过程消耗了254 个引物
答案 BCD
解析 由
可知，使用的引物
题图
P2 和P3 的碱基不需要完全互
配
，只需要部
补
对
分碱基互
配
即可，
补
对
A
；引物
一段核苷酸，引物与
错误
为
DNA 模板
合后，
链结
能
从其
够
3′端开始
接脱氧核苷酸，开始子
的合成，
连
链
B 正确；合
示可知，融
结
图
合PCR 的第一步两条
重叠部位即互
配
，可互
另一条
的引物，
链
补
对
为
链
C 正确；
若融合PCR 的第三步
得了
获
128 个融合基因，引物数目和新合成的子
数目相
链
同，即
程消耗了
该过
128×2－2＝254(个)引物，D 正确。
5.(2024·山
坊二模
东潍
)A 蛋白是某种激素合成的关键酶。为鉴定该激素合成的部
位及生理作用，科研团队利用无缝克隆技术将A 蛋白结合蛋白基因(P 基因)与葡
萄糖苷酸酶基因(GUS 基因)融合，构建A 蛋白检测探针，通过农杆菌转化法导入
拟南芥进行实验。相关原理、过程及质粒的结构如下图所示。
注：①bar
抗草甘
为
膦(一种除草剂)基因；TetR
四
素抗性基因；
为
环
AmpR
氨
青
为
苄
霉素抗性基因；②F1、F2、R1、R2
引物；
为
③BamH Ⅰ、Sma Ⅰ、Bcl Ⅰ为限制
。
酶
(1)无缝克隆时所需的酶除T5 核酸外切酶外还有________。用无缝克隆技术构建
GUS－P 融合基因的关键是R2引物5′端序列与________互补。
(2)利用双酶切法将融合基因插入Ti 质粒，选用的限制酶为________。扩增融合基
因所需的引物R1和F2应选用下列引物组合为________。
①5′－…CTTGGATGAT－3′ ②5′－…TAAGTTGTCT－3′
③5′－…ATTCAACAGA－3′ ④5′－…TCTGTTGAAT－3′
(3)利用农杆菌转化法将融合基因导入农杆菌、拟南芥细胞的过程中，需要筛选两
次，这两次筛选分别是________________________________________________
____________________________________________________________________
___________________________________________________________________。
(4)葡萄糖苷酸酶可以水解X－Gluc 呈蓝色，将转基因拟南芥置于不同培养液中
培养一段时间，然后分离不同部位的组织分别加入X－Gluc 进行鉴定，结果如下
表所示：
部位
根
茎
叶
完全培养液
蓝色
浅蓝
浅蓝
缺磷培养液
深蓝
蓝色
浅蓝
分析表明，该激素最主要的合成部位是________，通过实验结果分析该激素的生
理作用是_________________________________________________________
________________________。
答案 (1)DNA 聚合酶和DNA 连接酶 F1的3′端(或P 基因左侧序列)
(2)BclⅠ和SmaⅠ ①④
(3)先筛选出能在含四环素培养基上生长而不能在含氨苄青霉素培养基上生长的
农杆菌，再用含草甘膦的培养基筛选出导入融合基因的拟南芥细胞
(4)根 促进植物对磷元素的吸收
解析 (1)由
信息可知，利用无
克隆技
将
题图
缝
术
A 蛋白
合蛋白基因
结
(P 基因)与
葡萄糖苷酸
基因
酶
(GUS 基因)融合，构建A 蛋白
探
，所以无
克隆
所需
检测
针
缝
时
的
除
酶
T5 核酸外切
外
有
酶
还
DNA 聚合
和
酶
DNA
接
。
连
酶DNA 的两条
是反向
链
平行的，用无
克隆技
构建
缝
术
GUS－P 融合基因的关
是
键
R2引物5′端序列与F1
的3′端(或P 基因左
序列
侧
)互
。
补
(2)利用双
切法将融合基因插入
酶
Ti
粒的
质
T－
DNA 区，如果使用BamH Ⅰ，会同
破坏四
素抗性基因和氨
时
环
芐青霉素抗性基因
故选择Bcl Ⅰ和Sma Ⅰ。根据融合基因的放大
可知，
增
以
图
扩
时
DNA 的两条链
分
作模板，
增融合基因所需的引物
别
扩
R1和F2
用下列引物
合
应选
组
为3′端序列
可以与④5′－…TCTGTTGAAT－3′配
，
对
5′端序列的互
可以与
补链
①5′－…
CTTGGATGAT－3′配
，因此
用的引物
合
对
选
组
为①④。(3)利用
杆菌
化法将融
农
转
合基因导入
杆菌、
南芥
胞的
程中，需要
两次，
两次
分
是先
农
拟
细
过
筛选
这
筛选
别
出能在含四
素培养基上生
而不能在含氨
青霉素培养基上生
的
杆
筛选
环
长
苄
长
农
菌，再用含草甘
的培养基
出
入融合基因的
南芥
胞。
膦
筛选
导
拟
细
(4)葡萄糖苷酸酶
可以水解X－Gluc 呈
色，根据表格可知，在完全培养液中，只有根呈
色，
蓝
现蓝
说
明
激素最主要的合成部位是根，与完全培养液相比，在缺磷培养液中，根的
该
颜
色
深
，而在含磷的完全培养液中出
色，
明
激素的生理作用是促
变为
蓝
现蓝
说
该
进
植物
磷元素的吸收，促
葡萄糖苷酸
合成，水解
对
进
酶
X－Gluc 呈
色。
蓝
限时练24 赋予生物新的遗传特性的基因工程
(
：
时间
30 分
分
：
钟
值
50 分)
【精准强化】
重点1 基因工程和蛋白质工程
1.(2024·广西南宁市摸底)镰状细胞贫血是一种常染色体隐性遗传病，由正常血红
蛋白基因(HbA)突变为镰状细胞贫血基因(Hbs)引起，HbA 和Hbs 的某片段如图
甲。对胎儿进行基因检测的主要原理是：用MstⅡ限制酶处理PCR 扩增后的
DNA；加热使被酶切的DNA 片段解旋，用荧光标记的CTGACTCCT 序列与其杂
交；凝胶电泳分离。图乙是凝胶电泳后荧光出现的三种可能性。回答下列问题：
(1)图甲为基因HbA 和Hbs 的部分片段，据图可知，镰状细胞贫血是基因中发生
________导致的。基因突变具有不定向性，可产生________基因。
(2)胎儿c 的基因型为________，与胎儿c 具有相同基因型的一对夫妇生下患镰状
细胞贫血女儿的概率为________。
(3)基因治疗是治疗镰状细胞贫血最有效的方法，治疗时要构建含HbA 的基因表
达载体，构建基因表达载体首先需要用同一种限制酶切割HbA 和质粒，目的是
___________________________________________________________________，
再用DNA 连接酶连接，DNA 连接酶的主要功能是________________________。
构建基因表达载体的目的是____________________________________________
___________________________________________________________________。
答案 (1)碱基替换 一个以上的等位
(2)HbAHbs 1/8 (3)产生相同的末端 将切下来的双链DNA 片段“缝合”起
来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键(合理即可) 让目的基因在受体细胞中稳定
存在，并且遗传给下一代，同时能够使目的基因表达并发挥作用
解析 (1)据
甲分析可知，状
图
镰
胞
血是相
基因中
生碱基替
的
果。基
细
贫
应
发
换
结
因突
具有不定向性，可以
生一个以上的等位基因。
变
产
(2)
(3)用同一种限制
切割
酶
HbA 和
粒，目的是
质
让HbA 和
粒形成相同的末端。之
质
后再用DNA
接
接，
连
酶连
DNA
接
的主要功能是将切下来的双
连
酶
链DNA 片段
“
合
缝
”起来，恢复被限制
切开的磷酸二
。构建基因表达
体的目的是
酶
酯键
载
让
目的基因在受体
胞中
定存在，并且
下一代，同
能
使目的基因表达
细
稳
遗传给
时
够
并
作用。
发挥
2.(2024·山
沂高三模
东临
拟)经过不懈努力，我国科研人员从野生玉米“大刍草”
中，成功找回玉米人工驯化过程中丢失的一个控制高蛋白含量的优良基因
THP9，将此高蛋白基因克隆出来并转移到玉米细胞内，获得转基因高蛋白玉米新
品种。
EcoR Ⅰ
BamH Ⅰ
KpnⅠ
MfeⅠ
HindⅢ
5′－G↓AATTC－
3′
5′－CTTAA↑G－
3′
5′－G↓GATCC－
3′
5′－CCTAG↑G－
3′
5′－G↓GTACC
－3′
5′－CCATG↑G
－3′
5′－C↓AATTG
－3′
5′－GTTAA↑C
－3′
5′－A↓AGCTT
－3′
5′－TTCGA↑A
－3′
(1)THP9 基因游离的磷酸基团侧为________(填“5′”或“3′”)端，已知图中
THP9 基因转录方向为从左往右，则THP9 基因转录时的模板链是________链。
(2)构建基因表达载体时，若科研人员需将THP9 基因整合到如图质粒上，应使用
限制酶____________________ 切割图中质粒，使用限制酶
_____________________切割图中含THP9 基因的DNA 片段，以获得能正确表达
THP9 基因的重组质粒。
(3)为了筛选出含重组质粒的受体细胞，应在添加________________的选择培养
基上培养，培养后获得的菌落不能判定是否含有重组质粒，原因是
____________________________________________________________________
___________________________________________________________________。
(4)研究人员常用DNA 分子杂交技术检测THP9 基因有没有整合到受体细胞的染
色体DNA 上。检测时常使用________标记的目的基因单链片段作为探针。
答案 (1)5′ 乙
(2)MfeⅠ、HindⅢ EcoR Ⅰ、HindⅢ
(3)氨苄青霉素 含未重组质粒(或普通质粒)的受体细胞也能正常生长
(4)放射性同位素(或荧光分子等)
解析 (1)THP9 基因游离的磷酸基团侧为5′端，已知
中
图
THP9 基因
方向
转录
为
从左往右，RNA 聚合
沿
酶
着子
的
链
5′端延伸，即
中的乙
是模板
。
图
链
链
(2)
中
图
THP9 基因
方向
从左往右，即启
子位于左端，止子位于右端，因
基
转录
为
动
终
为该
因右
只有一个
切位点，故一定用
侧
酶
HindⅢ切割
粒和目的基因，于
粒来
质
对
质
说，
不能用EcoR Ⅰ
行切割
进
(含两个切割位点，切成片段了)，不能用BamH Ⅰ切割
(会切断启
子
动
)，那么在HindⅢ的左
只有
侧
MfeⅠ序列，而目的基因不能用该酶
切割，与MfeⅠ能形成相同黏性末端的是EcoR Ⅰ，故
粒用
质
Mfe Ⅰ、HindⅢ切割，
目的基因用EcoR Ⅰ、HindⅢ切割。(3)
了
出含重
粒的受体
胞，
在
为
筛选
组质
细
应
添加氨
青霉素的
培养基上培养，培养后
得的菌落不能判定是否含有重
苄
选择
获
组
粒，原因是含未重
粒
质
组质
(或普通
粒
质
)的受体
胞也能正常生
。
细
长(4)用DNA 分
子
交技
杂
术检测THP9 基因有没有整合到受体
胞的染色体
细
DNA 上，
程常
该过
使用放射性同位素(或
光分子等
荧
)
的目的基因
片段作
探
。
标记
单链
为
针
3.(2024·山
州一模
东滨
)研究人员利用水稻细胞培育能产生人HIV 抗体2G12 的水
稻胚乳细胞生物反应器，其基本流程包括表达载体的构建、农杆菌转化、水稻细
胞转化、转基因植株的筛选等。
(1)为成功构建表达载体，需在人工合成的人HIV 抗体2G12 基因首端添加启动子
你的选择是________(填字母)，依据是________________________________
__________________________________________________________________。
A.人B 细胞启动子
B.HIV 启动子
C.水稻胚乳细胞启动子
D.农杆菌启动子
(2)潮霉素对原核细胞和真核细胞的生长都有抑制作用。据此分析，下图所示重组
T－DNA 片段中潮霉素抗性基因为基因表达载体中的________，其作用是
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________。
(3)目的基因插入染色体的具体位置通常具有不确定性，可采用反向PCR 技术检
测。下图是利用这一技术分析人HIV 抗体2G12 基因插入染色体位置的流程图。
欲得到图中环状DNA，过程Ⅰ酶切时________(填“能”或“不能”)利用不同限
制酶。由图中环状DNA 至少经过________轮循环才能得到图示链状产物。
(4) 与其他工程技术相比，利用水稻生产人HIV 抗体2G12 的优势有
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
(答两点即可)。
答案 (1)C 水稻胚乳细胞启动子在水稻胚乳细胞中更容易被RNA 聚合酶识别
和结合，从而驱动转录
(2)标记基因 鉴别和筛选成功导入人HIV 抗体2G12 基因的农杆菌和水稻细胞
(3)能 3
(4)产量高；成本低；不受性别限制；不需要专业培养设备
解析 (1)利用水稻
胞培育能
生人
细
产
HIV 抗体2G12 的水稻胚乳
胞生物反
细
应
器，水稻胚乳
胞启
细
子在水稻胚乳
胞中更容易被
动
细
RNA 聚合
和
合，
酶识别
结
从而
，
驱动转录C 正确，A、B、D
。
错误(2)潮霉素抗性基因可用于
和
成功
鉴别
筛选
入人
导
HIV 抗体2G12 基因的
杆菌和水稻
胞，潮霉素抗性基因
基因表达
农
细
为
载
体中的
基因。
标记
(3)有些限制
切割形成的黏性末端相同，故能利用不同限制
酶
酶
切割。状
环
DNA 的两条
母
，根据
链为
链
DNA 半保留复制的特点，PCR
程一般
过
需要经过3
循
才能得到
示
状
物。
轮
环
图
链
产
(4)利用水稻
胞培育能
生人
细
产
HIV
抗体2G12 的水稻胚乳
胞生物反
器，具有
细
应
产量高；成本低；不受性
限制；不
别
需要
培养
等
点。
专业
设备
优
重点2 PCR 技术及应用
4.(2024·山
泰安一模
东
)与普通玉米相比，甜玉米细胞中可溶性糖向淀粉的转化较
慢导致可溶性糖含量高，汁多质脆。为提高甜玉米的商品价值，科研人员培育出
了超量表达G 蛋白转基因甜玉米新品种。在超量表达G 基因载体的构建中，所用
DNA 片段和Ti 质粒的酶切位点如图1、2 所示。
(1)强启动子能被________识别并结合，驱动基因持续转录。在培育转基因甜玉米
中，T－DNA 的作用是_______________________________________________
___________________________________________________________________。
为使DNA 片段能定向插入T－DNA 中，可用PCR 技术在DNA 片段的两端添加
限制酶识别序列，M、N 端添加的序列所对应的限制酶分别是________。处理好的
DNA 片段与Ti 质粒的重组过程共需要________种酶。
(2)外植体经脱分化形成的愈伤组织放入农杆菌液浸泡后，进行植物组织培养时
培养基中需加入________进行筛选，获得玉米株系a1、a2、a3、a4。通过对四个株系
的G 蛋白表达量进行测定，发现a4株系的表达量与野生型相近，原因可能是
____________________________________________________________________。
(3)下图是淀粉合成酶基因片段，其转录后形成的前体RNA 需通过剪接(切去内含
子对应序列)和加工后方能用于翻译。科研人员希望通过降低淀粉合成酶基因的
表达，进一步提高甜玉米中可溶性糖的含量，将吗啉反义寡核苷酸(RNA 剪接抑
制剂)导入玉米受精卵中，发现其基因表达受阻。科研人员对其作用机制提出两种
假说。
假说1：导致RNA 前体上内含子1 的对应序列不能被剪切；
假说2：导致RNA 前体上内含子1 和外显子2 的对应序列同时被剪切。
①为验证上述假说，分别在受精卵发育后3 天的胚细胞中从实验组和对照组提取
________，逆转录形成cDNA。若假说1 成立，使用图示引物2 和引物4 进行PCR
后电泳的结果为______________________________________________________
(目的条带的有无)。
②若要证明假说2，需选择图示引物________进行PCR。
③若某次实验电泳结果发现：实验组和对照组都没有任何条带，从PCR 操作过程
角度解释可能的原因是_______________________________________________
(至少写出两点)。
答案 (1)RNA 聚合酶 将强启动子和G 基因带入甜玉米细胞并整合到甜玉米细
胞的染色体DNA 上 NotⅠ和SacⅠ 3
(2)潮霉素 a4株系玉米中可能没有导入目的基因或目的基因未表达
(3)①总RNA 实验组有目的条带、对照组无目的条带 ②3 和4 ③复性温度
太高、引物自连或互连
解析 (1)
启
子能被
强
动
RNA 聚合
并
合。
酶识别
结
T－DNA 在
中的作用是
该实验
将
启
子和
强
动
G 基因
入甜玉米
胞并整合到甜玉米
胞的染色体
带
细
细
DNA 上。为
使G 基因在玉米植株中超量表达，确保
启
子和
应
强
动
G 基因不被破坏，故
先
应优
用
选
NotⅠ和SacⅠ
切割
粒，保
启
子
酶
质
为
证强
动
和G 基因能
在
粒上，
连
质
M、N
端添加的序列所
的限制
分
是
对应
酶
别
NotⅠ和SacⅠ，然后再用DNA
接
将
连
酶
启
子和
强
动
G 基因与
粒
接，因此
程共需
质
连
该过
3 种
。
酶
(2)由图2 可知，潮霉素
抗性基因位于Ti
粒的
质
T－DNA 上，会随T－DNA 整合到玉米
胞的染色体上
细
，
行植物
培养
培养基需加入潮霉素
行
。蛋白
的表达量与基因的表
进
组织
时
进
筛选
质
达有关，故a4株系G 蛋白表达量与野生型相近，即表达量
低的原因可能是其没
较
有
入目的基因或者目的基因没有表达。
导
(3)①
上述假
，分
从受精卵
为验证
说
别
发
育后3 天的
和
照
实验组
对
组胚
胞中提取
细
总RNA，逆
形成
转录
cDNA。根据引物
2 和引物4 在淀粉
合成基因片段上的位置，通
酶
过PCR
增能得到内含子
扩
2 的序
列，若假说1 成立，即
啉反
寡核苷酸
致
吗
义
导
RNA 前体上内含子1 的
序列不
对应
能被剪切，故
中
含有内含子
实验组
应
1 的序列，而
照
中
片段被切除了，因
对
组
该
此用引物2 和引物4
行
进
PCR 反
，其
果
中有目的条
，而
照
中
应
结
为实验组
带
对
组
无目的条
。
带②若要
明假
证
说2 成立，即RNA 前体上内含子1 和外
子
显
2 的对应
序列同
被剪切下去，
可以
示引物
时
则
选择图
3 和引物4
行
进
PCR，
察是否有目
观
的条
出
，如果
带
现
RNA 前体上内含子1 和外
子
显
2 的
序列同
被剪切下去，
对应
时
PCR 后
泳不会出
目的条
。
电
现
带③PCR 是通
温度来控制
过调节
DNA 双
的解聚
链
与
合的。在
结
PCR 操作
程中，如果复性温度太高、引物自
或互
，均会
致
过
连
连
导
泳后的
和
照
都没有任何条
出
。
电
实验组
对
组
带
现
