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专题10 生物技术与工程
5 大考点概览
考点01 发酵工程
考点02 细胞工程
考点03 胚胎工程
考点04 基因工程
考点05 生物技术的安全性和伦理问题
1．(25-26 高三下·辽宁朝阳·调研)海洋是生物医药创新的“蓝色宝库”。深海冷泉独特的高压、低温、营养
匮乏环境对开发生物医药具有重要意义。冷泉中的化能自养型生物硫酸盐还原菌（SRB）可用于新型抗病
毒药物的研发。用于扩大培养SRB 的发酵罐，无需添加的装置是（ ）
A．高压模拟装置
B．自动补给有机物的装置
C．温度监测装置
D．培养液过滤除菌装置
2．（2026 届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）下列关于传统发酵食品制作的叙述，正确的
是（ ）
A．制作葡萄酒时，需对葡萄汁和发酵装置进行高压蒸汽灭菌，以防止杂菌污染
B．制作腐乳时，发酵过程中有多种微生物参与，其中起主要作用的是毛霉
C．制作泡菜时，泡菜坛口的水封结构可营造有氧环境，满足乳酸菌的代谢需求
D．制作红枣醋时，酒精发酵完成后无须通气即可将酒精转化为醋酸
3．（吉林长春市2026 届高三质量监测）化合物E 被广泛应用于医药、食品和化工工业。菌株甲可生产
E，E 的产量与培养甲的碳源关系密切。某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和E 产量的影响，结果
见表。下列叙述错误的是（ ）
碳源种
类
培养后细胞干重（g/L）
E 产量（g/L）
葡萄糖
3.12
0.15
淀粉
0.01
0.00
制糖废
液
2.30
0.18
考点1
发酵工程
A．培养微生物的实验过程中，可用干热灭菌法对玻璃器皿进行灭菌
B．除碳源外，甲的生长还需要氮源和无机盐等营养物质
C．据表分析，碳源为淀粉时甲无法生产E，可能是甲将淀粉全部用于自身生长
D．表中最适合甲生长的碳源是葡萄糖，表中最适合生产E 的碳源是制糖废液
4．（2026 届辽宁沈阳市高三下学期二模）为获得荒漠植物根系周围土壤中的某种优良菌种，研究者利用
Ashby 固体培养基（见表格）进行选择培养，下列叙述正确的是（ ）
成分
甘露醇
C6H14O6
KH2PO4
MgSO4·7H2O
NaCl
CaSO4·2H2O
CaCO3
琼脂
H2O
用量
10g
0.2g
0.2g
0.2g
0.1g
5g
20g
定容至1000mL
A．应选择荒漠植物根系周围的土壤灭菌后制备土壤稀释液
B．该培养基能为微生物生长提供碳源和氮源等
C．利用平板划线法可获得固氮菌的单菌落并计数
D．筛选得到的菌种可用于荒漠植物微生物肥料的研制
5．（吉林长春市2026 届高三质量监测）某同学在实验中用紫色葡萄制作葡萄酒和葡萄醋。下列相关叙述
正确的是（ ）
A．最初添加的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的1/3
B．随着制酒时间的延长，发酵液的颜色会逐渐变浅
C．制作葡萄醋过程中，酵母菌和乳酸菌能大量繁殖
D．葡萄酒制醋时乙醇会转化为乙醛，乙醛再变为乙酸
6．（2026 届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）下列关于传统发酵技术的叙述正确的是
（ ）
A．腐乳发酵中利用了毛霉等微生物分泌的蛋白酶
B．制作泡菜时乳酸菌将葡萄糖分解为乳酸和CO2
C．酿酒过程中葡萄糖可为酵母菌的发酵提供碳源和氮源
D．果醋发酵需在无氧条件下进行，且温度高于果酒发酵
7．(25-26 高三·辽宁鞍山普通高中)螺蛳粉以“鲜、酸、爽、辣”闻名，其核心配料酸笋是由竹笋经乳酸
菌、酵母菌、醋酸菌等发酵而成，主要流程如下图。下列叙述不正确的是（ ）
A．冷却后接种是为了防止高温导致菌种失活
B．乳酸菌、酵母菌和醋酸菌均可使发酵液pH 下降
C．需严格控制发酵条件，否则会影响菌种生长及代谢物形成
D．酵母菌在无氧条件下大量繁殖和发酵，产生的酒精为醋酸发酵提供底物
8．(25-26 高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)微塑料是直径小于5 毫米的塑料碎片或颗粒，其
来源广泛、危害深远。科研人员从长期掩埋塑料垃圾的土壤中分离出了甲、乙两种微塑料降解菌，并利用
这两种微塑料降解菌进行了相关实验，实验记录及结果如图所示。下列叙述正确的是（ ）
注：三个实验组的总菌量相同，混合菌组按照1 1∶混合；残留率=剩余量/添加量×100%。
A．可使用添加微塑料的牛肉膏蛋白胨培养基从土壤中分离出微塑料降解菌
B．该实验结果显示，甲、乙两种微塑料降解菌在降解微塑料方面有协同作用
C．该实验证明了两种微塑料降解菌有降解微塑料的功能，且对生态环境无害
D．实验结束后，采用稀释涂布平板法能最快速度统计出培养液中的微生物数量
9．（2026 届黑龙江省大庆市高三二模）瘤胃是反刍动物（如牛、羊）具有的一种特殊消化器官，其内部
生活着多种厌氧微生物，其中一些可高效分解纤维素（注：刚果红可与纤维素形成红色复合物，但不与纤
维素水解产物发生此反应）。下列关于“分离瘤胃中纤维素分解菌”的实验操作，说法错误的是（ ）
A．利用以纤维素为唯一碳源的选择培养基筛选目的微生物
B．瘤胃中微生物采集、分离和鉴别都应在无氧条件下进行
C．筛选的菌种经梯度稀释后，用划线法接种至刚果红培养基鉴别
D．选择刚果红培养基上产生透明圈的菌落进行纤维素酶活性测定
10．不定项选择题（内蒙古包头市2026 年普通高等学校招生全国统一考试二模）苹果树腐烂由苹果树腐
烂菌感染引起，为开发生物防治途径，研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂菌生长的芽孢杆
菌，实验流程如下图。相关叙述正确的是（ ）
A．过程①取5g 土壤加入盛有45mL 无菌水的锥形瓶中，充分摇匀
B．过程③应使用固体培养基，用接种环进行接种后，在适宜条件下培养
C．过程③可直接通过观察芽孢杆菌的形状、大小、颜色进行筛选
D．乙组A 处长出的菌落直径应大于甲组A 处长出的菌落直径
11．不定项选择题（吉林长春市2026 届高三质量监测）DDT（化学式C14H9Cl5）是一种对环境有害、不溶
于水的有机氯类杀虫剂。某生物兴趣小组拟通过筛选得到高效降解DDT 的细菌，部分过程如下图。下列
叙述错误的是（ ）
A．接种①可将土壤悬浮液中的微生物分离
B．接种②时使用涂布器挑取候选菌并接种至液体培养基中
C．接种③时应选择DDT 含量最高的培养瓶中菌液用于接种
D．接种④能扩大培养筛选出的降解DDT 的细菌
12．不定项选择题（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026 届高三二模）食用腐烂水果后，人出现头晕、恶
心、呕吐或更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计
实验探究腐烂苹果不同区域微生物的种类和数量，实验基本步骤如图所示。下列说法错误的是（ ）
A．步骤二可以选用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种
B．在适宜环境下培养12 小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量
C．若⑤所在部位几乎未检测出微生物，则切掉①～④后的苹果便可放心食用
D．若①～⑤菌落种类和数量依次减少，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量可能越少
13．不定项选择题（辽宁名校联盟2026 届高三下学期高考模拟卷）某研究小组从南方红壤（pH=5.0）和
东北黑土（pH=7.5）中分离分解尿素的微生物，实验步骤如下。下列叙述错误的是（ ）
注：红壤中尿素分解菌因酸性抑制实际存活率仅为理论值的20%，酚红指示剂在碱性条件下变红。
稀释度
红壤
黑土
103
32
280
104
18
35
105
4
1
A．红壤组稀释度为103时，理论上土壤中尿素分解菌的值约为3.2×106个/g
B．若黑土组选择104稀释度计算，其对应土壤中尿素分解菌约为3.5×106个/g
C．筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质
D．可设置牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，判断该培养基是否具有选择作用
1．（内蒙古兴安盟2026 年高三年级下学期模拟）细胞工程在医疗、动物物种繁殖等方面有着广泛的应
用。下列相关叙述正确的是（ ）
A．从动物体内取出组织，用酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞
B．核移植技术与干细胞诱导技术结合，可用于修补人体损伤的器官
C．采用胚胎分割技术克隆动物时，可选用细胞未发生分化的囊胚
D．胚胎移植后，经受体孕育的后代，其遗传特性与受体保持基本一致
2．（内蒙古兴安盟2026 年高三年级下学期模拟）科学家制备抗HPV（人乳头瘤病毒）单克隆抗体用于开
发诊断试剂。下列叙述错误的是（ ）
A．可用灭活的病毒诱导细胞融合
B．用选择培养基筛选杂交瘤细胞
C．杂交瘤细胞均能产生抗HPV 抗体
考点2
细胞工程
D．该单克隆抗体识别HPV 特定抗原
3．（内蒙古兴安盟2026 年高三年级下学期模拟）黄酮类物质具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性，传
统方法将芒果粉碎后萃取和浓缩，生产效率低下，难以满足市场需求。可通过下列哪项技术迅速大量获
取？（ ）
A．基因工程
B．植物细胞培养
C．植物体细胞杂交
D．发酵工程
4．（2026 届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）合体滋养层细胞是由单核的滋养层细胞通过融合形成的多核
细胞，该类细胞不具有细胞增殖活力。为构建合体滋养层细胞模型，研究人员使用含不同浓度FSK 的培养
液培养单核细胞的滋养层细胞，结果如图所示。下列说法正确的是（ ）
A．随着FSK 溶液浓度升高，细胞融合的效率升高
B．培养过程中需定期更换培养液，以防止发生接触抑制
C．培养过程中需提供含95%O2和5%CO2的混合气体环境
D．正常发育过程中，滋养层细胞会发育成胎膜和胎盘的一部分
5．（2026 届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）研究人员研究了不同浓度的PEG 对大丽花叶片及花瓣原生质
体融合的影响，实验结果如表所示。下列说法错误的是（ ）
原生质体种类
PEG 浓度/%
融合率/%
原生质体状态
叶片
20
4.95
原生质体破裂较少
30
9.79
原生质体破裂较少
40
7.50
原生质体破裂较多
花瓣
20
11.25
原生质体破裂较少
30
9.25
原生质体破裂较多
40
6.88
原生质体破裂较多
A．实验前可用纤维素酶和果胶酶处理两种细胞的细胞壁获得原生质体
B．表中浓度为20%的PEG 溶液诱导大丽花花瓣原生质体融合的效果最好
C．在一定范围内，随PEG 浓度升高，叶片原生质体的融合率先升高后降低
D．PEG 浓度过高会导致原生质体过度吸水而破裂，降低融合率
6．（内蒙古包头市2026 年普通高等学校招生全国统一考试二模）某科研团队在培育铁皮石斛新品种并提
取石斛多糖时，分别采用了以下方法：①将铁皮石斛（2n=38）与抗寒的细茎石斛（2n=38）体细胞杂交获
得杂种植株；②利用铁皮石斛愈伤组织进行液体悬浮培养规模化提取石斛多糖；③通过农杆菌转化法将冷
响应基因导入铁皮石斛愈伤组织获得转基因植株。下列叙述正确的是（ ）
A．方法①获得的杂种植株是含有76 条染色体的二倍体，可通过减数分裂产生正常配子
B．方法②需控制培养基中的激素比例，以利于愈伤组织增殖和石斛多糖合成
C．方法③需筛选含重组Ti 质粒的愈伤组织，经再分化获得抗寒转基因植株
D．三种方法均依赖植物细胞的全能性，为铁皮石斛品种改良提供了新方案
7．(25-26 高三·辽宁鞍山普通高中)百香果含有百种以上的芳香物质，是世界上已知最芳香的水果之一，但
百香果多采用嫁接、扦插等方式进行无性繁殖，易携带母株病毒，导致果实品质下降、产量降低，生产中
可采取脱毒处理加以解决。下列叙述正确的是（ ）
A．离体的百香果组织必须经过灭菌后才能接种到培养基上
B．百香果的茎尖几乎不含病毒，是培养脱毒苗的理想材料
C．将外植体培养成愈伤组织的过程中要提供适宜光照条件
D．经植物组织培养获得的脱毒试管苗可直接用于大田种植
8．（吉林长春市2026 届高三质量监测）研究发现，使用抗CD38 单克隆抗体可显著抑制肾移植时发生的
免疫排斥反应，该抗体的制备过程和使用的96 孔板如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．培养细胞时需在培养液中加入抗生素以清除细胞代谢物
B．筛选②中96 孔板的每个孔内应接种多个细胞并对其进行克隆化培养
C．两次筛选后，需将获得的抗CD38 抗体在体外条件下大规模培养
D．该鼠源单克隆抗体在使用时存在刺激人体产生新抗体的风险
9．(25-26 高三下·辽宁县级重点高中协作体·二模)在利用植物细胞工程大量生产人参皂苷的过程中，以下操
作及说法错误的是（ ）
A．从人参根等部位获取外植体，经诱导形成愈伤组织，该过程体现了细胞的全能性
B．悬浮培养时，需要控制好温度、pH、溶氧量等条件，以保证细胞正常生长
C．定期更换培养液不仅能补充营养物质，还能减少有害代谢产物的积累
D．为提高人参皂苷的产量，可通过诱变处理悬浮培养的细胞，从而筛选高产突变体
10．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026 届高三二模）帕金森患者大脑内常出现α-突触核蛋白的聚集。
科学家研发了一种单克隆抗体prasinezumab，能与聚集的α-突触核蛋白结合，临床上显示该抗体能缓解部
分患者的病症。下列叙述正确的是（ ）
A．体内培养杂交瘤细胞时可将其注入小鼠的血液中培养
B．从被α-突触核蛋白免疫的实验动物脾脏中获取的B 细胞均能产生prasinezumab
C．体外培养杂交瘤细胞时使用松盖培养瓶并将其置于CO2培养箱中以营造95%氧气、5%CO2的气体环境
D．prasinezumab 与聚集的α-突触核蛋白结合后可被免疫细胞吞噬消化，该过程与细胞中的溶酶体有关
11．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026 届高三二模）紫杉醇是全球最重要的抗癌药物之一，某研究机构
设计了如下两个路径来提取。据此分析正确的是（ ）
A．M 表示愈伤组织，图示技术均可证明已分化的植物细胞具有全能性
B．紫杉醇属于次生代谢物，是植物基本的生命活动所必需的产物
C．路径一诱导芽的分化所需生长素更多，而诱导根的分化所需细胞分裂素更多
D．路径二振荡操作的目的是使愈伤组织在培养过程中充分分散成单个细胞
12．（辽宁名校联盟2026 届高三下学期高考模拟）世界上首个体细胞克隆猴是在我国诞生的，培育克隆
猴的流程如下图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
A．克隆猴的成功培育体现了动物细胞具有全能性
B．用灭活的仙台病毒短暂处理，目的是使mRNA 和TSA 容易进入细胞
C．处理重构胚的目的是调节相关基因表达，提高胚胎的发育率
D．克隆小猴的遗传性状由图中的胎猴以及环境共同决定
13．（2026 届黑龙江省大庆市高三二模）曲妥珠单抗是一种针对人表皮生长因子受体2（HER2）的人源
化单克隆抗体。它能特异性结合肿瘤细胞表面的HER2 从而阻断细胞生长信号，并激活免疫系统清除肿瘤
细胞。人源化抗体可降低抗体的免疫原性（引发人体免疫反应的能力），其制备过程如图。下列说法错误
的是（ ）
A．灭活病毒可用于过程A，与其表面的糖蛋白和一些酶有关
B．筛选②过程的原理是细胞增殖及抗体与抗原的特异性结合
C．过程B 可利用显微注射法将基因表达载体导入CHO 细胞
D．曲妥珠单抗在肿瘤治疗中起到靶向运输抗肿瘤药物的作用
14．（2026 届黑龙江省大庆市高三二模）铁皮石斛富含石斛多糖、石斛碱等成分，具抗氧化、提高免疫力
和抗癌等功效，可通过组织培养后移栽的方式进行快速繁殖。下列叙述不正确的是（ ）
A．铁皮石斛快速繁殖的生物学原理是植物细胞的全能性
B．植物激素浓度和配比会影响组织培养时细胞发育方向
C．获得长势良好的试管苗后，就可直接移栽入大棚种植
D．可从成熟植株中提取石斛多糖、石斛碱等次生代谢物
15．不定项选择题(25-26 高三下·辽宁朝阳·调研)下图为PML 蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述正确的
是（ ）
A．应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间
B．可以用灭活的病毒诱导W 细胞和骨髓瘤细胞融合
C．步骤2 的目的是去除不能产生所需抗体的细胞
D．应选择孔2 中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体
16．不定项选择题（2026 届辽宁沈阳市高三下学期二模）银杏黄酮可用于心脑血管疾病的治疗。利用银杏
愈伤组织生产该物质的过程中，添加茉莉酸甲酯（MeJA）对相关指标的影响，如图所示。下列叙述错误
的是（ ）
A．黄酮合成相关基因只在银杏特定组织中存在并表达
B．培养基中激素的浓度及比例会影响愈伤组织的形成和生长
C．MeJA 对愈伤组织生长的抑制作用强度与其浓度呈负相关
D．浓度为100mol/L 的MeJA 会抑制黄酮的产生
1．（2026 届辽宁沈阳市高三下学期二模）猪Xist 基因仅位于X 染色体上。当体细胞中存在两条X 染色体
考点3
胚胎工程
时，其中仅一条X 染色体上的Xist 基因会表达进而导致该染色体失活。已知敲除Xist 基因能提高猪核移植
胚胎的出生率。下列叙述正确的是（ ）
A．推测Xist 基因在正常雄猪体细胞中不表达
B．用电融合法将采集的卵母细胞直接与供体细胞融合
C．选择发育至原肠胚的胚胎细胞进行基因敲除最适合
D．同一供体经核移植产生多个子代显著增加了遗传多样性
2．（2026 届辽宁沈阳市高三下学期二模）在畜牧业生产上常应用到胚胎移植技术。下列叙述错误的是（
）
A．用于移植的胚胎可来自体外受精、体内受精和核移植等
B．用外源促性腺激素处理供体的目的是使其超数排卵
C．受体不会对来自同种供体的胚胎发生免疫排斥反应
D．经胚胎移植产生的后代，其遗传特性与受体保持一致
3．（黑龙江省哈尔滨市第三中学校2026 届高三二模）下列有关胚胎工程理论基础的叙述，正确的是（
）
A．在自然条件下，哺乳动物的受精作用在子宫内完成
B．常以卵细胞膜和透明带之间观察到两个极体作为受精的标志
C．精子触及透明带的瞬间，透明带发生生理反应，阻止后来的精子进入
D．体外受精需用获能液处理精子使精子获能，常见的获能液有效成分有肝素、Ca2+等
4．不定项选择题(25-26 高三·辽宁鞍山普通高中)应用转基因小鼠模型进行化学物质致癌性研究越来越受到
重视和认可，目前精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物的方法之一。该方法以精子作为外源
基因载体，使精子携带外源基因进入卵细胞。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。下列叙述正
确的是（ ）
A．导入外源基因的精子与卵细胞结合即可完成转化
B．过程②是体外受精，受精的标志是观察到雌、雄原核
C．早期胚胎应选择发育良好、形态正常的原肠胚进行操作
D．过程④胚胎移植之前，无需对代孕母鼠注射免疫抑制剂
5．不定项选择题（2026 届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）研究人员将绿色荧光蛋白
（GFP）基因导入小香猪体细胞并进行克隆猪的研究，其基本流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．过程①细胞培养液中加入血清的主要目的是调节培养液渗透压
B．过程③“去核”是通过显微操作法将卵母细胞的细胞核去除
C．常用电刺激或聚乙二醇激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育
D．过程⑤实现了早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
6．不定项选择题(25-26 高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)利用胚胎工程可以快速繁殖产奶量
高的奶牛，实际操作中需进行同期发情处理和性别控制技术等进一步提升繁殖效率。据图分析，下列叙述
错误的是（ ）
A．①过程与人工授精都需对获得的精子先进行获能处理
B．②对应的培养过程中，防止微生物污染属于无毒操作
C．③过程需用到胚胎分割技术，分割前需进行性别鉴定
D．④和⑤过程的受体牛繁殖能力正常，无须有优良性状
7．不定项选择题（2026 届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）某研究团队在应用羊胚胎
分割技术时，对桑葚胚采用酶处理辅助分割法，即先用链霉蛋白酶等酶类软化或溶解胚胎的透明带，再进
行机械分割。分割胚胎先在体外培养，再移植到受体母羊体内，其整个发育环境与正常胚胎存在差异。下
列相关分析错误的是（ ）
A．酶处理辅助分割法利用了酶的专一性，其目的是直接为胚胎发育提供营养
B．链霉蛋白酶处理能提高分割成功率，证明透明带的存在会抑制卵裂球细胞全能性
C．发育环境的差异是导致分割胚的发育率和成活率低于正常胚胎的原因之一
D．为消除发育环境的差异，应将分割后的胚胎直接移植回供体羊的子宫内进行体内发育
8．不定项选择题（2026 届黑龙江省大庆市高三二模）2006 年，东北农业大学以“东北民猪”耳缘皮肤中
的成纤维细胞为核供体，成功培育出体细胞克隆猪。下列说法正确的是（ ）
A．可用胰蛋白酶处理猪耳缘皮肤组织制成细胞悬液进行细胞培养，获得核供体
B．从屠宰场收集的猪卵巢中采集MⅠ期卵母细胞，经显微操作去核后作为核受体
C．电刺激激活重构胚，体外培养至适宜阶段后移入经发情处理的代孕母猪体内
D．胚胎移植前，对供体和受体进行免疫检查，以免外来胚胎引发免疫排斥反应
1．（2026 届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）为鉴定目的基因是否正确插入质粒中，某同学准备设计引物
进行PCR 鉴定，如图所示为a、b、c3 种引物在正确重组质粒中的相应位置，Tet
R为四环素抗性基因。下
列说法错误的是
A．可选择引物a 和c 进行扩增，来判断目的基因是否插入到质粒中
B．可选择引物b 和c 进行扩增，来判断目的基因是否正确插入质粒中
C．选择引物a 和b 进行扩增，若扩增产物约为650 bp，说明基因反向插入质粒中
D．将质粒导入大肠杆菌后，若表现出四环素抗性，说明导入的质粒含有目的基因
2．（内蒙古包头市2026 年普通高等学校招生全国统一考试第二次模拟）关于“DNA 片段的扩增及电泳鉴
定”实验，下列叙述正确的是（ ）
A．PCR 扩增DNA 片段时DNA 双链的解聚原理与细胞内相同
B．耐高温的DNA 聚合酶可直接在模板链的3′端从头合成子链
C．电泳可鉴定不同长度的DNA 分子是因为它们在凝胶中的迁移速率不同
D．染色后的凝胶条带的位置可以反映DNA 分子碱基序列的组成
3．(25-26 高三·辽宁鞍山普通高中)基于AI（人工智能）的蛋白质设计方法可以利用现有蛋白质数据库以及
机器深度“学习算法”来预测新型蛋白质的结构及功能。下列叙述不正确的是（ ）
A．AI 可帮助人们更深入了解蛋白质的结构与功能关系
考点4
基因工程
B．AI 设计新型蛋白质的过程是按中心法则进行的
C．可以通过改造或合成基因来获得经AI 设计的蛋白质
D．AI 可帮助人们高效地设计出自然界中没有的蛋白质
4．（内蒙古包头市2026 年普通高等学校招生全国统一考试二模）下列关于现代生物技术及生物学实验的
叙述，正确的是（ ）
A．琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 产物的过程中，琼脂糖融化后应立即加入核酸染料，以免凝胶凝固导致染料
分布不均
B．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
C．DNA 粗提取实验中，研磨液中的EDTA（蛋白质变性剂）可抑制DNA 酶活性，防止研磨过程中DNA
被水解
D．凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA 分子的具体位置
5．(25-26 高三下·辽宁抚顺清原满族自治县高级中学·模拟)某研究团队欲通过PCR 扩增疟原虫的pfcrt 基因
部分序列。已知该基因的部分DNA 序列如图。研究人员设计了4 种引物。F1：5′—ATGCG—3′；F2：5′—
CGATA—3′；R1：5′—TGACC—3′；R2：5′—GCATT—3′。以疟原虫pfcrt 基因为模板进行PCR 后，电泳结
果只显示1 条与目的基因等长的清晰条带。下列哪组引物组合可成功扩增出目的片段（ ）
A．F1和R1
B．F1和R2
C．F2和R1
D．F2和R2
6．（辽宁名校联盟2026 届高三下学期高考模拟）黄色荧光蛋白与绿色荧光蛋白相比，只是第203 位的苏
氨酸变成了酪氨酸，科学家根据两种蛋白质结构上的差异，改造绿色荧光蛋白基因，获得了黄色荧光蛋
白。下列叙述错误的是（ ）
A．上述获得黄色荧光蛋白的过程属于蛋白质工程
B．由于酪氨酸有两种密码子，必须合成出两种碱基序列的基因
C．筛选重组DNA 是该技术的重要操作之一
D．蛋白质的功能是设计蛋白质结构的依据
7．（辽宁名校联盟2026 届高三下学期高考模拟）DNA 的粗提取和鉴定实验用到了多种试剂。下列相关叙
述错误的是（ ）
A．研磨时加入清水研磨有利于DNA 的释放
B．95%的酒精预冷能加快DNA 的析出
C．2mol/L 的NaCl 溶液中DNA 的溶解度较高
D．鉴定DNA 时，实验组和对照组都要加入二苯胺试剂
8．（内蒙古兴安盟2026 年高三年级下学期模拟）山羊乳中β-乳球蛋白（BLG）是一种主要致敏原，为避
免山羊乳过敏，研究人员利用CRISPR/Cas9 系统敲除了山羊乳腺细胞中BLG 基因，同时在相应位点导入
人乳铁蛋白（hLF）基因。如图为利用该技术获得转基因山羊的操作过程。回答下列问题：
(1)hLF 基因可以通过________（答出一点）以及PCR 扩增的方式获取。通过PCR 仪扩增hLF 基因，需要
________种引物，其在________这一步骤中能与hLF 基因母链进行碱基互补配对。
(2)过程①的转基因操作________（填“属于”或“不属于”）蛋白质工程。过程②的目的是________，其
方法是________。
(3)在sgBLG/Cas9 复合物中，sgBLG 为能准确识别图中山羊DNA 特定序列的RNA，并引导Cas9 蛋白对
DNA 进行切割，复合物1 所识别的DNA 序列为5′-TATACTGGC-3′，则sgBLG 的序列为5′-________-3′。
(4)为了检测得到的转基因母羊导入目的基因是否成功表达，应取________，检测________。
9．（2026 届黑龙江省齐齐哈尔市高三二模）利用工程菌表达重组蛋白时，蛋白质常以未折叠和无活性的
包涵体形式积累。研究人员将乳糖酶基因LacZ(3075 bp)构建至自剪切型表达载体pTWIN1(注：CBD、Ssp
DnaB 与LacZm 形成融合基因CSL，其中CBD 编码的标签蛋白具有几丁质结合活性。Ssp DnaB 编码内含
肽，具有自我切割能力，能在特定条件下将自身与目标蛋白切割开)，其构建过程如图所示。构建完成后，
将重组质粒转入大肠杆菌，经诱导表达、纯化，制备无标签乳糖酶。回答下列问题。
(1)启动子位于基因的上游，是___________识别和结合的部位，图中将基因表达载体导入大肠杆菌的方法
是用___________处理大肠杆菌细胞，使其处于一种___________的生理状态。
(2)研究人员首先对乳糖酶基因(LacZ)进行了扩增，为保证LacZ 基因能与质粒pUC18 正确连接，设计引物
时需要在图中LacZ 基因左右两侧引物的5＇端分别添加___________的识别序列。原LacZ 基因中含有一个
Bam H Ⅰ切割位点序列GGATCC，通过引物设计将其替换为GAGTCC，获得了基因LacZm，其编码的氨基
酸与LacZ 相同，原因是___________。
(3)将基因LacZm 用限制酶酶切后与克隆载体pUC18 进行重组，进而构建至表达载体pTWIN1 中，从而获
得原核表达重组质粒pTWIN1-LacZm。对重组质粒pTWIN1-LacZm 进行双酶切，然后电泳，得到的结果如
图所示(泳道1 为分子量Marker，泳道2 为pTWIN1-LacZm 酶切产物，泳道3 为未酶切的pTWIN1-
LacZm)。电泳图中代表LacZm 基因的条带是___________(填“a”“b”或“c”)。未酶切重组质粒分子量大于
其酶切产物，然而电泳图谱显示结果却相反，其原因是___________。
(4)将重组质粒pTWIN1-LacZm 导入大肠杆菌，经诱导表达后，破碎细胞、离心、收集上清，制得粗酶
液。然后利用几丁质亲和吸附柱对粗酶液进行纯化，纯化后乳糖酶位于吸附柱；加入裂解液，在特定条件
下诱导融合蛋白进行自剪切，目的是___________。
10．（内蒙古包头市2026 年普通高等学校招生全国统一考试二模）BCL11A 蛋白是一种转录抑制因子，能
与γ 珠蛋白基因启动子上游的特异性结合位点结合，抑制γ 珠蛋白基因的表达。为确定BCL11A 蛋白结合
位点的具体位置，科研人员利用下列多对引物扩增了γ 珠蛋白基因上游7 种不同长度的片段，分别将这些
片段插入载体中并导入受体细胞，一段时间后进行荧光检测，相关信息如图所示。请回答：
(1)PCR 扩增γ 珠蛋白基因上游不同长度片段的过程中，在缓冲体系中除需要加入Mg2+和模板外，还需要添
加________（答出两点即可）。PCR 每次循环要经历________三步。
(2)据图可知，为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，要在F1~F7 末端添加的序列所对应
的限制酶是________，在R 末端添加的序列所对应的限制酶是________。
(3)将构建的载体导入除去BCL11A 基因的受体细胞后，含F1~F6 与R 扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体
细胞均有荧光，含F7 与R 扩增产物的受体细胞不表达荧光蛋白，无荧光。含F7 与R 扩增产物的受体细胞
不表达荧光蛋白的原因是________。
(4)若BCL11A 蛋白结合位点位于引物F3 与F4 所对应序列之间的区段上，向培养液中添加适量的雌激素，
则含________（选填“F1~F6”）与R 扩增产物的受体细胞有荧光。
11．（2026 届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）抗体是由两条完全相同的重链（H 链）
和两条完全相同的轻链（L 链）连接而成的，两种链近N 端可变区（V 区），识别结合抗原，近C 端是恒
定区（C 区），结构如图1 所示。人表皮生长因子受体-2（HER2）基因和表皮生长因子受体（EGFR）基
因是重要的癌基因，在多种肿瘤中共表达，且互相作为旁路耐药通路，大大影响了传统抗体-药物偶联物
（ADC）疗法的治疗效果。为了解决这一问题，科研人员构建了双特异性抗体偶联药物（BsADC），同时
靶向肿瘤细胞表面HER2 和EGFR，实现了对传统ADC 疗法的升级。
(1)利用双杂交瘤融合法制备双特异性抗体（如图2）。以传统的单克隆抗体技术制备分别能产生HER2 抗
体和EGFR 抗体的杂交瘤细胞，再将两种杂交瘤细胞融合，需对融合细胞进行_______和抗体检测，与抗
原_______出现阳性反应的即为目标细胞。但是此技术制备出的双特异性抗体仍具有较大的随机性，原因
是_______。
(2)利用蛋白质工程技术制备双特异性抗体：将HER2 抗体和EGFR 抗体的轻链与重链可变区DNA 序列，
通过重叠延伸PCR 技术连接在一起，如图3。
根据图4 所示的重叠延伸PCR 技术原理，为实现DNA 片段的精准融合，引物P2 的5＇端需要与引物P3 的
_______端（填“5＇”或“3＇”）序列_______（填“相同”或“互补”）。按照上述原理合成图3 所示
重组DNA 需要设计_______种引物。将融合序列与质粒连接，导入酵母菌获得纯度较高、装配正确的双特
异性单链抗体。与大肠杆菌相比，酵母菌作为受体细胞的优势是_______。还需要根据酵母菌偏好的密码
子对融合序列进行优化，目的是_______。
(3)HER2 与EGFR 在多种肿瘤组织中分布不均匀，单靶点治疗可能因无法有效清除低表达靶点的肿瘤细
胞，从而诱导适应性耐药及疾病复发。ADC 由抗体、接头、药物所组成，其中的“药物”可以是
_______、化学药物或放射性物质。与只使用一种单克隆抗体构建的ADC 相比，利用HER2-EGFR 双抗构
建的BsADC 的优势在于_______（答出一点即可）。
12．（辽宁名校联盟2026 届高三下学期高考模拟）向大豆中转入高出油率基因可满足人们对大豆油的需
求。培育转基因大豆的过程如图所示（AluⅠ、SmaⅠ、HindⅢ和PstⅠ为限制酶，AmpR为氨苄青霉素抗性基
因），回答下列问题：
(1)若用限制酶同时切割含高出油率基因的DNA 和Ti 质粒，为保证高出油率基因与质粒的正确连接，选用
的限制酶为______切割后的目的基因和Ti 质粒需用______连接。
(2)图中③过程通过农杆菌的______作用，使目的基因在________。1 号培养基中添加______对农杆菌进行
筛选，能在其上生长的农杆菌为______的菌体，因此需要进一步的筛选。
(3)3 号、4 号培养基的成分不同主要体现在_________，由愈伤组织培养为转基因大豆植株，______（填
“能”或“不能”）体现植物细胞的全能性。
(4)在离体的植物器官、组织和细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项操作要求不是必需的
______。
A．无菌操作
B．添加营养物质
C．给予适宜光照
D．添加植物激素
13．（2026 届黑龙江省大庆市高三二模）某研究小组利用PCR 技术，在不需要加入模板的条件下，合成
被间隔区隔开的靶基因反向重复序列（图1 靶基因干扰片段），将该序列与特定载体结合可以构建RNAi
（RNA 干扰）表达载体。在受体细胞中，该序列转录产生hpRNA（空间结构如图2），hpRNA 的双链部
分（臂）与靶基因具有相同的序列，可诱导靶基因的mRNA 特异性降解而抑制靶基因表达。请回答下列问
题：
I、该小组选择水稻的polIV 基因作为靶基因，设计正向引物（引物F），其碱基序列与polIV 基因外显子
（编码蛋白质区段）部分的60 个碱基序列相同。将引物F 的3'末端9 个碱基替换为其反向互补序列得到反
向引物（引物R）。根据基因载体pCAMBIA1301 上的酶切位点，分别在引物F 和引物R 的5'端添加合适
的限制酶识别序列，便于靶基因干扰片段插入。
(1)分析图3 中引物F 的序列和载体信息，下列能正确表示引物R 的是（ ）
A．5'—TCTAGA---------------------------CTTGCCCAC—3'
B．5'—TCTAGA---------------------------CACCCGTTC—3'
C．5'—GGTACC---------------------------CTTGCCCAC—3'
D．5'—GGTACC--------------------------CACCCGTTC—3'
(2)采用PCR 技术扩增polIV 基因的干扰片段时，向PCR 反应体系中加入H2O、引物F 和引物R、4 种脱氧
核苷酸、TaqDNA 聚合酶和_________，不需要加入DNA 模板的原因是_________。扩增得到的polIV 基因
的干扰片段长度为_________个碱基对。
II、用相应限制酶分别对polIV 基因的干扰片段和基因表达载体pCAMBIA1301 进行双酶切， 再利用T4
DNA 连接酶进行连接，获得重组质粒。
(3)E.coli DNA 连接酶与T4 DNA 连接酶在作用上的区别是 _________。为了检测构建的重组质粒是否正
确，利用PCR 技术将整个重组质粒进行扩增，选择大小正确的扩增产物进行基因测序，利用_________工
具将测序结果与已知的结果进行比对，若比对成功即为构建正确的RNAi 表达载体。
(4)将RNAi 表达载体导入农杆菌中，利用农杆菌侵染野生型水稻外植体脱分化后形成的_________，再经
过筛选和培养得到转基因水稻植株。
(5)利用X-Gluc 对转基因水稻叶片进行β-葡萄糖苷酸酶组织化学活性检测。结果显示，与野生型水稻相
比，转基因水稻叶片切口处理后显现出蓝色，说明_________。为了检测RNAi 表达载体是否能够抑制靶基
因的表达，对靶基因的表达量进行了实时荧光PCR 定量检测，下列说法错误的是_________。
①选择转基因水稻叶片为材料，进行实时荧光PCR 来检测靶基因的表达量
②提取转基因水稻相关组织细胞中的基因组DNA 作为实时荧光PCR 的模板
③根据实时荧光PCR 的结果，如果转基因水稻的Ct 值（PCR 产物荧光强度达到设定阈值时的PCR 循环
数）远低于野生型水稻，则说明RNAi 表达载体成功发挥了作用
RNAi
④
表达载体转录产生的hpRNA 分子环状部分的碱基序列为5'—CACCCGUUC—3'
14．（2026 届内蒙古自治区乌兰察布市高三年级第二次模拟）为实现水稻产量提升，科研人员尝试将动物
来源的肥胖基因FTO 的cDNA 导入水稻细胞，构建含FTO 基因的T-DNA 序列（结构如图所示）。科研人
员以水稻愈伤组织为受体，采用农杆菌转化法将该T-DNA 转入水稻细胞，经植物组织培养技术获得转基
因水稻植株，进而探究FTO 基因对水稻产量的影响。回答下列问题：
(1)选择水稻启动子驱动FTO 基因表达的优势是_______。农杆菌转化法中，农杆菌介导转化的原理是
_______。水稻愈伤组织发育为完整转基因植株过程的理论基础是_______。
(2)对转化后的水稻愈伤组织进行培养时，需在培养基中添加潮霉素，该操作的目的是_______。Flag 是一
种常用于蛋白质纯化和检测的短肽标签，其与FTO 基因串联后，会表达出“FTO 蛋白+Flag 标签”的融合
蛋白，该设置的目的是_______。
(3)为验证FTO 基因的表达能提升水稻产量，科研人员设置三组实验：甲组为非转基因野生型水稻，乙组
为转入空载体（仅不含FTO 基因）的水稻，丙组为转入上述重组载体的转基因水稻。将三组水稻置于相同
且适宜的环境中培养，收获后统计有效穗数、每穗粒数、千粒重。
①设置乙组实验的目的是_______；
②若实验结果为________，则可证明FTO 基因的表达能提升水稻产量。
(4)若将该转基因水稻投入生产，还需进行田间多代种植实验，目的是_______，从生物安全角度分析，还
需评估_______。
15．（2026 届辽宁沈阳市高三下学期二模）培育转VEGF 基因的山羊，有利于提高羊绒产量。但转基因动
物含有标记基因可能造成安全性问题。研究者利用Cre/LoxP 系统删除标记基因。回答下列问题。
(1)基因表达载体除了含有标记基因外，还应有____（写出两点）等，其中标记基因的作用是____。
(2)如图1 所示，Cre 酶能切割特定位点形成黏性末端。结合图1 和图2 分析，Cre 酶能将____（填“①”或
“②”）中的目标片段删除，并且其余片段末端可以连接形成一个DNA 分子。
(3)为保证转化后可删除标记基因并构建P1，图3 中引物a 和b 应添加的LoxP 序列分别为5’-____-3’、5’-
____-3’（写出已知的8 个碱基），同时限制酶识别序列需添加在LoxP 序列的____端。用BglⅡ和HindⅢ
处理P1并对产物进行电泳鉴定，结果长度为____，说明P1构建成功。
(4)将P1导入山羊皮肤成纤维细胞，经检测VEGF 已成功表达。此时还需要____的作用将标记基因删除。利
用荧光显微镜观察，结果为____，说明已成功删除标记基因。
16．(25-26 高三·辽宁鞍山普通高中)肿瘤细胞表面的PD-L1 蛋白与T 细胞表面的受体蛋白PD-1 结合，抑制
T 细胞的活化和增殖，使得肿瘤细胞开启免疫逃逸。为了达到更好的癌症治疗效果，科研人员对此开展系
列研究。
(1)机体能通过________免疫杀伤癌细胞，该过程体现了免疫系统的________功能。
(2)科研人员欲通过基因编辑技术（CRISPR-Cas9）敲除T 细胞的PD-1 基因，以达到治疗癌症的目的。基
因编辑CRISPR-Cas9 技术系统主要由人工设计的gRNA 和Cas9 蛋白组成，gRNA 可与靶序列特异性结
合，Cas9 蛋白对靶序列所在DNA 进行剪切，gRNA 和Cas9 蛋白复合体的功能类似于_________酶。
(3)科研人员设计的gRNA 能靶向识别PD-1 基因，gRNA 基因序列与携带Cas9 基因的PX330 质粒构建重组
质粒。其中PX330 质粒部分碱基序列及BbsⅠ限制酶识别序列如图1 所示。据图1 分析，限制酶BbsⅠ切割
后质粒b 处黏性末端序列（5′→3′）为__________。
(4)研究人员以不同的方式处理黑色素肿瘤小鼠（如图2）。其中注射物Ⅰ为__________，组6 的作用为
_________。图2 中组1、组3 和组5 的结果说明_________。
17．（吉林长春市2026 届高三质量监测）肿瘤的生长和转移具有血管依赖性，阻断血管生成是遏制肿瘤
的有效策略。KDR 基因编码的蛋白是肿瘤血管内皮细胞表面的关键受体。病毒的胸苷激酶基因（tk）编码
的酶能将无毒性的前体药物更昔洛韦（GCV）转化为毒性物质，导致细胞死亡。为特异性杀伤肿瘤血管内
皮细胞，科研人员拟构建由KDR 基因启动子驱动tk 表达的重组质粒（KDR-tk），并检测其杀伤效果，部
分过程如图。回答下列问题。
限制酶
识别序列和切割位点
Nhe Ⅰ
5′-G↓CTAGC-3′
Mfe Ⅰ
5′-C↓AATTG-3′
Age Ⅰ
5′-A↓CCGGT-3′
EcoR Ⅰ
5′-G↓AATTC-3′
Xba Ⅰ
5′-T↓CTAGA-3′
Hind Ⅲ
5′-A↓AGCTT-3′
(1)启动子是_______识别和结合的部位，因此无启动子的tk 无法表达。为达到使用GCV 特异性杀伤肿瘤血
管内皮细胞的目的，科研人员从众多启动子中选择了KDR 基因启动子序列构建载体，推测是由于KDR 基
因_______。
(2)向①②两个PCR 反应体系中提供的组分不同的有_______。将反应体系放入PCR 仪中进行反应，每次循
环按序可以分为变性、_______、延伸三步。
(3)图中KDR 基因启动子的a 链与所在基因的模板链为同一条链，已知b 链序列为5′-
GAGCATTAAAACTGAA……CGTAGAGTCTGCGCAG-3′，则过程①构建的一对引物序列为_______。
5′-GCATTAAAACTGAAGTGAAGTG-3′
①
5′-GCTAGCGAGCATTAAAACTGAA-3′
②
5′-GGTACCCTGCGCAGACTCTACG-3′
③
5′-ACCGGTCTGCGCAGACTCTACG-3′
④
(4)为保证正确连接，过程④最好选择用限制酶_______处理质粒，选用限制酶_______处理KDR 基因启动
子-tk，此过程还需用DNA 连接酶，其催化连接的化学键是_______。获得的KDR-tk 重组质粒，经检测鉴
定后导入大肠杆菌体内。
(5)研究人员提取大肠杆菌中的重组质粒，将其导入HUVEC 细胞（常用作体外模拟肿瘤的血管内皮细胞
系），一段时间后，在转化成功细胞的培养液中加入_______进行培养，于不同时间检测细胞存活率，证
明实验成功的实验结果是_______。
1．（2026 届东北三省部分学校哈师大附中等校高三第二次模拟）线粒体疾病由细胞核或线粒体基因突变
所致，常累及神经、肌肉等能量需求高的组织器官。通过诱导多能干细胞（iPS 细胞）研究线粒体疾病的
流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．可以将特定基因通过转基因技术导入患者成纤维细胞实现重新编程
B．患者iPS 细胞分化出的特定靶细胞移植回患者体内会引发免疫排斥
C．基因编辑线粒体DNA 纠正突变，可以实现线粒体疾病的个性化治疗
D．iPS 细胞不存在治疗性克隆所涉及到的抛弃早期胚胎的伦理争议
考点5
生物技术的安全性和伦理问题
