文档文本内容
专题16 基因工程
考点概览
考点01 基因工程及其应用
考点02 蛋白质工程
基因工程及其应用
一、单选题
1．（2025·辽宁·一模）随着现代科技的不断发展，获得细胞产物的方法越来越多，下列相关叙述正确的是
（ ）
A．通过发酵工程，可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
B．可利用基因工程菌生产药用蛋白，如经蛋白质工程改造的干扰素
C．细胞产物的工厂化生产主要通过促进单个细胞中代谢产物含量提高产量
D．利用杂交瘤技术生产单克隆抗体，体外传代培养需定期用胰蛋白酶处理
【答案】B
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免
疫的B 淋巴细胞；诱导B 细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛
选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培
养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】A、单细胞蛋白是指通过发酵工程获得的大量的微生物菌体，而不是从微生物细胞中提取的，A
错误；
B、基因工程菌是利用基因工程技术将目的基因导入受体细胞构建而成的，可用于生产药用蛋白，如经蛋
白质工程改造的干扰素，B 正确；
C、细胞产物的工厂化生产主要是通过培养大量细胞，而不是单纯促进单个细胞中代谢产物含量来提高产
量，C 错误；
D、杂交瘤细胞在体外传代培养为悬浮培养，不需要定期用胰蛋白酶处理，D 错误。
2．（2025·黑龙江大庆·一模）嵌合抗原受体T 细胞（CAR-T）疗法是一种治疗癌症的新方法。该疗法通过
提取患者体内的T 细胞，利用基因工程技术为其装备
制导系统
（肿瘤抗原嵌合受体），再将改造后的
“
”
T 细胞回输到患者体内，以消灭肿瘤细胞。下列叙述错误的是（ ）
A．T 细胞分化、发育、成熟的场所是胸腺
考点01
B．该疗法中改造T 细胞的原理是基因突变
C．改造后的T 细胞可识别并靶向裂解肿瘤细胞
D．该疗法的优点之一是不会引发免疫排斥反应
【答案】B
【分析】本题意在考查基因工程在免疫学方面的应用，要求学生识记胸腺是T 细胞分化、发育、成熟的场
所，基因工程的原理是基因重组，以及效应T 细胞的作用是使靶细胞裂解死亡释放出抗原。
【详解】A、胸腺是T 细胞分化、发育、成熟的场所，A 正确；
B、依题意得，该疗法中利用基因工程技术改造T 细胞，所以其原理是基因重组，B 错误；
C、因T 细胞装备有
制导系统
（肿瘤抗原嵌合受体），而
“
”
T 细胞又可使靶细胞裂解死亡，所以改造后
的T 细胞可识别并靶向裂解肿瘤细胞，C 正确；
D、因为该疗法的T 细胞取自患者体内，因此不会会引发免疫排斥反应，D 正确。
二、多选题
3．（2025·辽宁·一模）在基因工程操作中，科研人员利用两种限制酶（EcoRI 和 Not I）处理基因载体，
进行电泳检测，结果如图所示，下列相关叙述错误的是（ ）
A．该基因载体最可能是环状DNA 分子
B．该DNA 分子上有2 个EcoRI 酶切位点
C．EcoRI 和 Not I 的切点之间最长相距约9kb
D．限制酶作用于该载体的氢键使其断裂
【答案】BD
【分析】1、基因工程又称基因拼接技术或DNA 重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和
微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建重组DNA 分子，然后导
入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。
2、基因工程的操作步骤：提取目的基因；目的基因与运载体结合；将目的基因导入受体细胞；目的基因
的检测和表达。
【详解】A、由题图可知，当仅用Not I 切割载体时，仅产生一种长度的DNA 片段（10kb），因此该载体
最有可能为环状DNA 分子，该DNA 分子上只有1 个Not I 酶切位点，A 正确；
B、该基因载体是环状DNA 分子，由题图可知，当仅用EcoR I 切割载体时，产生2 种长度的DNA 片段：
2kb 和6kb，该载体DNA 片段长10kb，所以用EcoR I 切割载体应产生3 个DNA 片段：2 个2kb 和1 个
6kb。该DNA 分子上有3 个EcoR I 酶切位点，B 错误；
C、由题可知，两种限制酶同时切割时则产生6bp、2bp 和1bp3 种长度的DNA 片段：1 个6kb、1 个2kb、2
个1kb，所以两种限制酶的酶切位点至少相距9bp，C 正确；
D、限制酶切割载体时直接破坏的是作用位点上两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键，D 错误。
三、非选择题
4．（2025·辽宁大连·一模）乳糖酶可被用于水解牛奶中的乳糖来生产低乳糖牛奶。普通乳糖酶热稳定差，
在低温条件下才具有水解活性。为了获得高产耐高温乳糖酶的重组枯草杆菌，科研人员将bgaB 基因（表
达产物是一种乳糖酶）插入含有强启动子P43 的质粒pZ01 中，构建重组质粒pZ01-bgaB 并转化至枯草杆
菌中表达，主要技术路线如下图。
回答下列问题：
(1)牛奶生产中一般不使用抗生素，低温下生产低乳糖牛奶过程中可能存在 ，使牛奶质量不能得到
保障。科研人员在众多产乳糖酶微生物中选择了嗜热脂肪芽孢杆菌为材料获取乳糖酶基因，理由是
。
(2)pZ01 上的P43 是 识别和结合的部位，可驱动目的基因高效转录出mRNA。P43 中含KpnI 酶切
位点，酶切后将失去其所必须的序列（E 序列）；bgaB 基因不含限制酶切割位点。据图分析，为保证
bgaB 基因能与pZ01 正确连接并正常表达，在设计扩增bgaB 基因的引物时，应在引物1 的5'端添加
；引物2 的5'端添加 。
(3)过程
需用到的工具酶是
①
，双酶切pZ01 后回收 kb（引物5'端添加的序列长度均忽略
不计）的DNA 片段用于重组质粒的构建。重组质粒中保留卡那霉素抗性基因的目的是 。
【答案】(1) 杂菌污染 啫热菌能在高温中正常生活，从该菌中获取的基因，其表达产物在高温下
可能具有较高的活性
(2) RNA 聚合酶 限制酶KpnI 识别序列和E 序列 限制酶BamHⅠ的识别序列
(3) DNA 连接酶 6.7 便于筛选出含有重组质粒pZ01-bgaB 的受体细胞
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标
记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞；
（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）低温下生产低乳糖牛奶过程中，由于牛奶生产一般不使用抗生素，所以可能存在杂菌污染
的问题，杂菌在牛奶中生长繁殖，会影响牛奶的质量，使牛奶质量不能得到保障；普通乳糖酶热稳定差，
在低温条件下才具有水解活性，而科研人员要获得高产耐高温乳糖酶的重组枯草杆菌，啫热菌能在高温中
正常生活，从该菌中获取的基因，其表达产物在高温下可能具有较高的活性；
（2）由题意可知，pZ01 上的P43 是强启动子，是RNA 聚合酶识别和结合的部位，可驱动目的基因高效转
录出mRNA；由图可知，P43 中含KpnI 酶切位点，酶切后将失去其所必须的序列（E 序列），为保证
bgaB 基因能与pZ01 正确连接并正常表达，需要用限制酶KpnI 和BamHⅠ进行双酶切。因为bgaB 基因不含
限制酶切割位点，所以在设计扩增bgaB 基因的引物时，应在引物1 的5'端添加限制酶KpnI 识别序列和E
序列，引物2 的5'端添加限制酶BamHⅠ的识别序列；
（3）过程
是将目的基因和载体连接形成重组质粒，需用到的工具酶是
①
DNA 连接酶。从图中可知，pZ01
的长度是9kb，bgaB 基因的长度是2kb，重组质粒的长度为8.7kb，所以用HindⅢ和BamHⅠ双酶切pZ01 后，
切去了一部分片段，回收的用于重组质粒构建的DNA 片段长度为（8.7-2=）6.7kb（引物5'端添加的序列长
度均忽略不计）；重组质粒中保留卡那霉素抗性基因作为标记基因，其目的是便于筛选出含有重组质粒
pZ01-bgaB 的受体细胞，在含有卡那霉素的培养基中，含有重组质粒pZ01-bgaB（含卡那霉素抗性基因）
的受体细胞能够存活，而不含重组质粒的细胞不能存活。
5．（2025·黑龙江·一模）葡萄糖二酸是一种葡萄糖衍生物，广泛应用于医药、保健和聚合物材料等领域。
传统的葡萄糖二酸合成主要通过化学氧化葡萄糖实现，存在选择性低、产生副产物和高污染废物等问题。
我国研究人员利用酿酒酵母实现了葡萄糖二酸的高效生产。肌醇加氧酶（MIOX）和糖醛酸脱氢酶（Udh）
是从葡萄糖到葡萄糖二酸的生物合成途径中的两种关键酶，研究人员将融合蛋白基因MIOX4—Udh 导入酿
酒酵母的基因组，经过高通量筛选最终获得目的菌株GA16。
(1)研究人员需设计MIOX4 基因的引物M1、M2及Udh 基因的引物U1、U2，分别利用PCR 扩增基因MIOX4
和Udh，然后混合杂交把基因MIOX4 和Udh 拼接在一起。设计4 种引物时应做到 。获得融合蛋白
基因MIOX4—Udh 后利用PCR 扩增时 （填
需要
或
不需要
）另外设计引物。
“
”
“
”
(2)研究人员将含融合蛋白基因MIOX4—Udh 的DNA 片段以及酿酒酵母的染色体DNA 用 切割，然
后用 拼接（如图1），并进一步获得目的菌株GA16。为保证融合蛋白基因导入位置的正确性，避
免酿酒酵母其他内源碱基序列对融合蛋白基因MTOX4—Udh 表达的干扰，还需对基因表达载体利用PCR
扩增后检测，选择的最佳引物组合是 。
(3)Myo-肌醇是合成葡萄糖二酸的前体物质，研究人员通过调控相关基因表达、改善培养条件等措施，对
目的菌株GA16 进行优化培养，想进一步提高葡萄糖二酸的生产效率，优化培养前（图2）后（图3）的测
量结果如图。据图分析，研究人员的目的 （填
已经
或
未
）达到，依据是
“
”
“
”
。改善培
养条件是指 。
注：OD600 的数值可反映反应容器中的酿酒酵母的浓度。
【答案】(1) M1、M2中的一种引物与U1、U2中的一种引物必须具有互补配对的片段 不需要
(2) （相同）限制酶 DNA 连接酶 引物1 和引物4
(3) 已经 与优化培养前相比，葡萄糖 二酸浓度和OD600 的数值升高，Myo-肌醇的浓度降低
调节反应容器中碳源、氮源的浓 度（或比例）、温度等（合理即可）
【分析】构建基因表达载体时，需要用到的工具酶有限制酶和DNA 连接酶，限制酶用来切劃质粒载体和
目的基因，DNA 连接酶用来连接目的基因和质粒载体。
【详解】（1）为实现MIOX4 基因和Udh 基因的拼接，引物设计需要注意的是M1、M2中的一种引物与
U1、U2中的一种引物必须具有互补配对的片段，使扩增后的基因片段能通过碱基互补配对完成连接。由于
融合基因的两端仍可分别与 4 种引物中的另外2 种 结合，因此得到融合基因后用 PCR 扩增时不需要另外
专门设计新引物。
（2）切割DNA 分子的工具是限制性内切核酸酶，又称限制酶，DNA 连接酶可连接DNA 片段之间的磷酸
二酯键，故研究人员将含融合蛋白基因MIOX4—Udh 的DNA 片段以及酿酒酵母的染色体DNA 用同种限
制酶切割，然后用DNA 连接酶拼接，并进一步获得目的菌株GA16。为保证融合蛋白基因 MIOX4 一Udh
导人位置的正确性并能够表 达，利用PCR 扩增时需用引物1 和引物4，因为这两种引物分别结合启动子
区和终止子区。
（3）据图分析，与优化培养前相比，葡萄糖二 酸浓度和OD600 的数值升高，Myo-肌醇的浓 度降低，说
明通过控制相关基因表达、改善培 养条件等措施加快了Myo-肌醇向葡萄糖二 酸的转化，研究人员的目
的已经达到。改善培养条件是指调节反应容器中碳源、氮源的浓度、温度等。
6．（2025·黑龙江吉林·一模）实验室某小组新发现一个调控水稻种子活力的基因Oshipll，并通过基因编辑
获得含有其突变基因a、b、c 的三种水稻，来鉴定该基因作用机制。利用CRISPR/Cas9 复合体进行基因编
辑时，复合体首先会定位目标序列（非模板链）的5´-NGG-3´位点（N 表示任意一种碱基），然后利用自
身所含的一段20bp 长度的向导RNA，与该位点5´端相连的序列互补配对，若能够互补，复合物会切割互
补序列某位点，使该位点插入或丢失部分碱基，可能导致基因突变失活。下图表示相应基因的非模板链部
分序列和编码的肽链的部分氨基酸序列。回答下列问题。
相应基因合成的肽链的氨基酸序列为
Oshipll MANSKSLLLCWCSLLLL……*73
a MANSKSLLLLLVLAPPP……*64
b MANSKSLLL*9
c MANSKSLLLLAAAAPPAL……*85
注：各个英文大写字母表示不同的氨基酸；*后面的数字表示肽链氨基酸个数；终止密
码子为UAA、UAG、UGA
(1)该复合物与基因工程基本操作工具中 酶作用相似，作用的化学键为 。
(2)若分析基因a、b、c 的突变位点，应设计 ，扩增相应基因，然后测序，并利用
分析比较得出突变位点。
(3)该复合物所含的向导RNA 的序列为5´- ...-3´（只填5´端前6 个碱基），b 基因所编码肽链的氨基
酸数目比Oshipll 减少的原因是 。
(4)下图图1 为携带基因Oshipll 及突变基因a、b、c 的水稻萌发处理后发芽率比较。图2 为用不同浓度
ABA 浸泡5 天后，携带基因Oshipll 及突变基因a、b 的水稻发芽指数（发芽指数可反映种子萌发的速度，
发芽指数越高种子萌发速度越快）比较。从图中数据可以得出基因Oshipll 对于水稻萌发的作用为
；出现图2 结果的作用机制可能是 。
【答案】(1) 限制酶 磷酸二酯键
(2) 特异性引物 序列比对工具（BLAST）
(3) GCAGAG 基因b 的基因编辑位点增加了一个碱基，使终止密码子提前出现，翻译出多肽链变
短
(4) 提高了发芽率，缩短了发芽时间 Oshipll 抵抗ABA 的作用来促进萌发
【分析】限制性核酸内切酶能够识别双链DNA 分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位
的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
【详解】（1）由题意可知，CRISPR/Cas9 复合体进行基因编辑时，会切割互补序列某位点，与基因工程
中限制酶作用相似，作用的化学键为磷酸二酯键。
（2）PCR 技术可以特异性地扩增目的基因。若分析基因a、b、c 的突变位点，应设计特异性引物，扩增相
应基因，然后测序，并利用序列比对工具（如BLAST）等分析比较得出突变位点。
（3）CRISPR/Cas9 复合体含有的向导RNA 定位目标序列的5´-NGG-3´位点（N 表示任意一种碱基），与
该位点5´端相连的序列互补配对，故向导RNA 的序列为5´-GCAGAG-3´，对比Oshipll 和突变基因b 的序
列可知，基因b 的基因编辑位点增加了一个碱基A，使终止密码子提前出现，导致翻译提前终止，翻译出
多肽链变短。
（4）由图1 可知，携带基因Oshipll 水稻的发芽率高于携带突变基因a、b、c 的水稻。由图2 可知，在3 种
ABA 浓度下，携带基因Oshipll 水稻的发芽指数高于携带突变基因a、b 的水稻，即种子萌发速度快。综上
所述，基因Oshipll 对于水稻萌发的作用为提高水稻种子的发芽率和发芽速率，缩短了发芽时间。图2 中，
携带突变基因a、b 的水稻随着ABA 浓度升高，发芽指数下降程度大于携带基因Oshipll 水稻，可能是由于
基因Oshipll 抵抗ABA 的作用来促进萌发。
7．（2025·辽宁·一模）科研团队通过转基因获得的大肠杆菌工程菌，成为监测残留在生物组织或环境中四
环素水平的
报警器
，其监测原理如图
“
”
1 所示。天然大肠杆菌不具备图1 中所示基因和四环素抗性基因。
有关限制酶的识别序列及切割位点如图2 所示。
(1)根据图1、图2 的信息，至少需要使用 种酶才能将DNA 片段1、片段2 正确拼接成一段完整的
DNA 分子，其中在拼接处的碱基序列为 （填写编号）。
(2)图3 是构建基因表达载体时所选用的质粒，请在图4 中绘制出构建成功的重组质粒示意图，并标明基因
。
图4 的重组质粒分别表达TetR 蛋白、GFP 蛋白时，所使用的模板链位于 （同一条\不同）DNA 单
链，判断依据是 。
(3)筛选充当
报警器
的大肠杆菌工程菌时，应将大肠杆菌培养在含有适宜浓度的四环素培养基上，当菌
“
”
落出现 现象时，表明重组质粒成功导入大肠杆菌。能在该培养基上形成菌落的大肠杆菌
（一定\不一定）含有重组质粒。
(4)为提高对环境中四环素水平监测的有效性，研究人员将GFP 的第65 位丝氨酸突变成苏氨酸后，增加了
绿色荧光稳定性和强度。该项技术属于 （基因工程\蛋白质工程）。
【答案】(1) 3 ②或③
(2)
不同 重组质粒中TetR 基因和GFP 基因转录方向不同
(3) 绿色荧光 不一定
(4)蛋白质
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩
增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动
子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。
（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）为保证重组质粒能正确连接，选择的两种限制酶切割片段后应能形成相同的黏性末端，据
图可知，可选择XbaⅠ和SpeⅠ，此后还要用DNA 连接酶进行连接，故至少需要3 种酶才能将DNA 片段1、
片段2 正确拼接成一段完整的DNA。
（2）重组质粒含有目的基因、标记基因、限制酶切割位点、启动子、终止子、复制原点，结合图示可知，
启动子有启动子1 和启动子2，还应包括GFP 基因，将目的基因导入质粒两种酶切位点之间，故可绘制图
形如下：见答案。分析题图，重组质粒中TetR 基因和GFP 基因转录方向不同，故图4 的重组质粒分别表
达TetR 蛋白、GFP 蛋白时，所使用的模板链位于不同DNA 单链。
（3）分析题图，图中含有GFP 蛋白（绿色荧光蛋白）和四环素抗性基因，筛选充当
报警器
的大肠杆
“
”
菌工程菌时，应将大肠杆菌培养在含有适宜浓度的四环素培养基上，当菌落出现绿色荧光现象时，表明重
组质粒成功导入大肠杆菌；由于含四环素抗性基因的未重组质粒也可导入大肠杆菌，使其在培养基上形成
菌落，故能在该培养基上形成菌落的大肠杆菌不一定含有重组质粒。
（4）该项技术最终改变的是GFP（蛋白质）的结构，属于蛋白质工程。
8．（2025·辽宁沈阳·一模）马铃薯栽培种
大西洋
易受到致病疫毒感染而患
晚疫病
，马铃薯
“
”
“
”
CYP83BI 基因的表达产物对该病菌具有一定的防御作用。现欲通过基因工程技术提高该基因在马铃薯植株
中的表达量，实现品种改良。回答下列问题：
(1)从
大西洋
细胞中提取总
“
”
RNA，经过 过程得到模板DNA（甲），再利用In-Fusion 技术构建重
组载体，大致过程如图1 所示。序列1、2 应分别添加在相应引物的 （填5′或3′）端，PCR1 过程中
至少需要 次循环才能得到乙。序列1、2 的碱基序列不同，这样设计的优点是 。
(2)构建成功的重组载体中部分序列如图2 所示，将其导入马铃薯外植体，经植物组织培养发育成完整植株。
利用荧光显微镜观察不同植株的细胞，初步筛选出显 色的细胞所对应的植株。
(3)从筛选出的植株中随机取三株（A、B、C），通过 等技术检测出目的基因均已整合到染色体
DNA 上且转录出了mRNA。
(4)进一步检测CYP83B1 基因转录水平，结果如图3，图中植株 可能达到了品种改良目的；为确认是
否成功改良，还需做哪两个方面的检测和鉴定？ ； 。
【答案】(1) 逆转录 5' 3/三 避免反向连接和自身环化
(2)红
(3)PCR
(4) A 和B 检测目的基因是否翻译出蛋白质/用致病疫霉感染植株来确定马铃薯植株的抗性是否增
强 个体生物学水平的鉴定/抗病接种实验
【分析】1、基因工程的基本操作程序包括目的基因的筛选与获取，基因表达载体的构建，将目的基因导
入受体细胞和目的基因的检测与鉴定；
2、PCR 是一项根据DNA 半保留复制的原理，在体外提供参与DNA 复制的各种组分与反应条件，对目的
基因的核苷酸序列进行大量复制的技术，利用PCR 可以快速的获取和扩增目的基因。
【详解】（1）从
大西洋
细胞中提取总
“
”
RNA，经过逆转录过程得到模板DNA（甲），再利用In-Fusion
技术构建重组载体，序列1、2 中具有限制酶的识别序列，PCR 扩增过程中，子链的延伸方向是从子链的
5'端到3'端，所以序列1、2 应分别添加在相应引物的5'端，PCR1 过程中至少需要三次循环才能得到目的
基因乙。为了防止自身环化和避免反向连接，一般序列1、2 的碱基序列一般不同。
（2）依据图2，构建的重组载体中含有mCherry（红色荧光蛋白基因），CYP83B1-mCherry 融合基因的表
达产物会发出红色荧光，所以重组载体导入受体细胞（马铃薯外植体），并表达成功后，利用荧光显微镜
观察不同植株的细胞，初步筛选出显红色的细胞所对应的植株。
（3）检测目的基因均已整合到染色体DNA 上且转录出了mRNA，可通过PCR 技术实现。
（4）图3 中，植株A 和B 中mRNA 的相对含量高于对照组（大西洋），说明植株A 和B 可能达到了品种
改良的目的；为了进一步确认改良是否成功，还需要：
用致病疫霉感染植株来确定马铃薯植株的抗性是
①
否增强，来检测目的基因是否翻译出蛋白质；
进行抗病接种实验，即个体生物学水平的鉴定。
②
9．（2025·内蒙古阿拉善盟·一模）双乙酰是啤酒中的主要风味物质，含量过高会影响啤酒的品质；谷胱甘
肽可以提高啤酒的抗老化能力。研究发现，ILV2 基因编码双乙酰合成中的关键酶，GSH1 基因编码谷胱甘
肽合成中的关键酶。为生产低双乙酰且抗老化的啤酒，科研人员运用基因工程技术制备啤酒酵母工程菌，
过程如图，其中CUPI 基因的表达产物可使细胞对一定浓度的硫酸铜产生抗性。请分析回答：
SalⅠ
5'-G↓TCGAC-3'
Kpn Ⅰ
5'-G↓GTACC-3'
Sph Ⅰ
5' -GCATG↓C -3
Xba Ⅰ
5'-T↓CTAGA-3''
Bgl Ⅱ
5'-A↓GATCT-3'
Pst Ⅰ
5'-CTCC↓AG-3'
(1)分析图1 可知，需用 （填限制酶名称）切割质粒1 以获取CUPI 基因。
(2)转化后的啤酒酵母应置于含 的培养基中进行初步筛选。
(3)进一步鉴定需要以转化后啤酒酵母的 为模板，用图示两种引物进行PCR 扩增。若扩增
产物的大小约为1300bp，则说明 基因已整合到啤酒酵母的染色体上。
(4)将啤酒酵母工程菌与未转化的受体菌分别置于麦芽汁培养基中培养，定期取样检测，结果如图2。
据图2 分析，啤酒酵母工程菌抗老化能力 。啤酒酵母工程菌的双乙酰合成量明显
未转化的受体菌，原因是 。
【答案】(1)Bgl Ⅱ 和 Sal Ⅰ
(2)一定浓度的硫酸铜
(3) 总DNA CUP1 基因和GSH1 基因
(4) 增强 低于 啤酒酵母工程菌的ILV2 基因被破坏
【分析】基因工程的基本操作程序包括四个步骤：目的基因的获得、基因表达载体的构建、将目的基因导
入受体细胞、目的基因的检测和鉴定。其中需要用的基本工具有限制性内切核酸酶（简称限制酶）、DNA
连接酶和运载体。限制酶能够识别DNA 上特定的碱基序列，将DNA 从特定的位置切开，用同种的限制酶
处理目的DNA 和运载体，得到相同的末端，再用DNA 连接酶将目的基因和运载体连接起来，形成重组运
载体。
【详解】（1）观察图1 中质粒1 的结构，CUPI 基因两端的限制酶切割位点分别为Sal Ⅰ和Bg1Ⅱ，所以要
用Sal Ⅰ和Bg1Ⅱ切割质粒1，才能将CUPI 基因完整地从质粒1 上切割下来；
（2）由题意“CUPI 基因的表达产物可使细胞对一定浓度的硫酸铜产生抗性
可知，转化后的啤酒酵母应
”
置于含一定浓度的硫酸铜的培养基中进行初步筛选，这样就可以筛选出转化后含有CUPI 基因的啤酒酵母，
只有成功导入并表达CUPI 基因的啤酒酵母才能在含铜离子的培养基中生存；
（3）进一步鉴定需要检测目的基因是否整合到啤酒酵母的染色体上，所以应以转化后啤酒酵母的总DNA
为模板，因为啤酒酵母的总DNA 包含了可能整合进去的CUPI 基因等所有遗传物质；由图1 可知，用Kpn
Ⅰ和Pst Ⅰ处理重组质粒后导入啤酒酵母的片段含有CUPI 基因和GSH1 基因。已知CUPI 基因大小为
1028bp，引物1 到引物2 之间还包含ILV2 -左部分片段（270bp），1028+270=1298，约为1300bp，因此扩
增产物的大小约为1300bp 则说明CUPI 基因导入啤酒酵母的染色体上，也说明CUPI 基因和GSH1 基因已
整合到啤酒酵母的染色体上；
（4）由题意可知，谷胱甘肽含量越高，抗老化能力越强。从图2 可以看出，工程菌的谷胱甘肽含量高于
未转化的受体菌，所以啤酒酵母工程菌抗老化能力增强；由图2 可知，啤酒酵母工程菌的双乙酰合成量明
显低于未转化的受体菌，由题意可知，ILV2 基因是编码双乙酰合成中的关键酶，如果转化的啤酒酵母工程
菌的ILV2 基因被破坏，就不能编码双乙酰合成中的关键酶，从而使工程菌的双乙酰合成量降低。
10．（2025·辽宁锦州·一模）香蕉在生长过程中常因感染病原体而减产。为了增加香蕉的抗病能力，从某
生物中提取mRNA 通过逆转录获得抗病基因，构建表达载体，通过农杆菌转化法获得转基因抗病香蕉，过
程如图1。回答下列问题：
(1)DNA 在扩增的过程中需要引物，引物的作用是 。由mRNA 逆转录获得抗病基因时，不但需要引
物，且需在引物 端添加相应的限制酶序列。
(2)在构建重组质粒时，需要加入相应的限制酶，请在图2 空白方框中写出被限制酶切割后抗病基因两端的
黏性末端序列 。
(3)重组质粒转入农杆菌时，常使用
处理农杆菌，其目的是 。
(4)取一部分在添加了 的培养基上正常生长的香蕉细胞，进行植物组织培养得到转基因抗病香蕉植株。
图1 中
分别表示的过程是
①②
，
过程培养基中生长素和细胞分裂素的
①②
等都会影响植物细
胞的发育方向。
(5)植物组织培养获得的转基因抗病香蕉需要进行个体生物学水平的鉴定。欲从个体生物学水平来鉴定抗病
基因是否赋予香蕉抗病特性的操作是 。
【答案】(1) 使DNA 聚合酶能够从引物的3，端开始连接脱氧核苷酸 5'
(2)
(3)增大细胞膜通透性，提高转化效率
(4) 潮霉素 脱分化、再分化 浓度和比例
(5) 进行抗病香蕉的接种实验（或用病原体来感染该转基因香蕉，观察其抗病特性及抗性的程度）
【分析】对限制酶选择条件：不能破坏目的基因和启动子、终止子，以便于目的基因和载体正确连接。
【详解】（1） 引物是一小段能与DNA 母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，引物的作用是使
DNA 聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸；子链合成从引物的3，端开始，因此添加限制酶序列
只能连接在引物的5'端。
（2） 根据质粒上的限制酶切割位点可知，XbaⅠ和SpeⅠ会破坏抗性基因和终止子，只能选择HindⅢ和
EcoRⅠ两种限制酶对抗病基因和质粒载体进行切割，且抗病基因的转录方向从右往左，所以抗病基因靠近
启动子一端用HindⅢ切割，另一端用EcoRⅠ切割，故抗病基因左端产生EcoRⅠ的黏性末端，右端产生
HindⅢ的黏性末端，左端的黏性末端序列为AATT，右端为AGCT，如图所示：见答案。
（3）钙离子处理能增大细胞膜的通透性，使转化更容易成功。
（4）在添加了潮霉素的培养基中能筛选到含有潮霉素的植物细胞；
表示脱分化形成愈伤组织，
表示
①
②
再分化形成植株； 植物组织培养需添加生长素和细胞分裂素两种关键性激素，它们的浓度、比例等都会
影响植物细胞的发育方向
（5） 植物组织培养获得的转基因抗病香蕉需要进行个体生物学水平的鉴定，其做法是对培养的转基因抗
病香蕉进行病原体接种实验，以确定导入的抗病基因是否赋予了香蕉抗病特性及抗性的程度。
蛋白质工程
一、单选题
1．（2025·辽宁本溪·一模）人工智能（AI）技术包括大数据分析、深度学习等方法，下列关于利用AI 技
术在生物医药领域的应用叙述错误的是（ ）
A．对基因组数据进行处理和分析，识别疾病相关的基因突变，为精准医疗提供支持
B．对蛋白质数据进行分析，能够预测患者体内某些蛋白质的三维结构以便设计新药物，该过程属于蛋
白质工程技术
C．通过智能穿戴设备实时监测患者的生理参数，预测健康风险，并提供诊断建议
D．AI 技术在生物医药领域的应用会涉及到众多的法规和伦理问题。例如，如何处理AI 决策中的错误
和责任、以及如何避免AI 技术加剧医疗不平等等问题
【答案】B
【分析】蛋白质工程概念及基本原理（1）蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系
作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生
产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）（2）蛋白质工程崛起的缘由：
基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质。（3）蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋
白质的结构，又称为第二代的基因工程。（4）基本途径：预期蛋白质功能
设计预期的蛋白质结构
推
→
→
测应有氨基酸序列
找到对应的脱氧核苷酸序列（基因），最终还是回到基因工程上来解决蛋白质的合成
→
。
考点02
【详解】A、人工智能技术中的大数据分析、深度学习等方法可以对基因组数据进行处理和分析。通过分
析大量的基因组数据，能够识别出与疾病相关的基因突变，这些信息对于精准医疗具有重要意义，可为医
生制定个性化的治疗方案提供支持，A 正确；
B、蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，
对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。而利用AI 技术对蛋
白质数据进行分析，预测患者体内某些蛋白质的三维结构，只是获取蛋白质结构信息的一种手段，并不等
同于蛋白质工程技术。蛋白质工程的核心是对基因进行操作来改造或制造蛋白质，B 错误；
C、智能穿戴设备可以实时收集患者的生理参数，如心率、血压、体温等。借助人工智能技术对这些实时
监测到的数据进行分析和处理，能够预测患者的健康风险，并根据分析结果提供相应的诊断建议，帮助患
者及时了解自身健康状况并采取相应措施，C 正确；
D、人工智能在生物医药领域的应用确实会涉及众多法规和伦理问题。例如，当AI 做出决策出现错误时，
责任如何界定；在医疗资源分配等方面，如何避免AI 技术加剧医疗不平等的现象等。这些都是在推广和
应用AI 技术于生物医药领域时需要考虑和解决的重要问题，D 正确。
2．（2025·辽宁大连·一模）门冬胰岛素是一种速效型胰岛素，由天门冬氨酸替换人胰岛素B 链第28 位的
脯氨酸获得。下列有关门冬胰岛素的叙述错误的是（ ）
A．制备过程应用了蛋白质工程技术
B．氨基酸之间可以形成肽键和氢键
C．在细胞的核糖体上合成
D．能与细胞内受体结合而快速起作用
【答案】D
【分析】组成蛋白质的基本单位是氨基酸，组成蛋白质的氨基酸至少含有一个氨基和一个羧基，且都有一
个氨基和一个羧基连接在同一个碳原子上，氨基酸因为R 基的不同而不同。
【详解】A、制备过程修改了蛋白质的氨基酸序列，应用了蛋白质工程技术，A 正确；
B、形成肽链时，氨基酸之间形成肽键，肽链盘曲折叠时，氨基酸之间形成氢键，B 正确；
C、门冬胰岛素的化学本质是蛋白质，在细胞的核糖体上合成，C 正确；
D、门冬胰岛素的化学本质是蛋白质，其对应的受体在细胞膜表面，D 错误。
3．（2025·黑龙江吉林·一模）新型蛋白质进化模型EVOLVEpro 可以利用氨基酸序列，仅通过少量学习和
最低限度的实验测试来预测蛋白质空间结构，从而获得新型高活性蛋白质改造方案。下列有关说法正确的
是（ ）
A．预测蛋白质结构需要依据肽链中肽键的结构、氨基酸的物理性质与结构
B．氨基酸是蛋白质的基本单位，氨基酸发生替换一定使蛋白质的结构和功能发生改变
C．EVOLVEpro 在蛋白质工程广泛应用后将不再需要借助基因工程手段改造蛋白质
D．通过EVOLVEpro 得到的蛋白质还需要进行进一步的功能检测实验才可以投入生产
【答案】D
【分析】蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合
成，对现有蛋白质进行改造，或者制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产生活需求。
【详解】A、对蛋白质进行分子设计应从预期的蛋白质功能出发，对蛋白质的空间结构进行设计，不是肽
键的结构和氨基酸的物理性质与结构，A 错误；
B、氨基酸是蛋白质的基本单位，氨基酸发生替换后蛋白质的结构和功能可能没有发生改变，尤其个别氨
基酸的改变可能没有影响，B 错误；
C、新型蛋白质进化模型EVOLVEpro 可以利用氨基酸序列，蛋白质工程仍需要基因修饰或基因合成等手段，
EVOLVEpro 在蛋白质工程广泛应用后将还需要借助基因工程手段改造蛋白质，使得产品更优良，C 错误；
D、通过EVOLVEpro 得到的蛋白质还需要进行进一步的功能检测实验才可以投入生产，确保对人体安全没
有副作用，D 正确。
4．（2025·黑龙江大庆·一模）据统计，每年全球约10 万人死于蛇毒。眼镜蛇毒液中的三指毒素（3FTxs）
本质为蛋白质，可与人体的烟碱乙酰胆碱受体结合，干扰正常的神经传导，迅速引发肌肉瘫痪、呼吸衰竭
和组织坏死。2024 年诺贝尔化学奖获得者DavidBaker 教授研究团队用AI 技术结合蛋白质工程获得了热稳
定性高的迷你蛋白（S），可与3FTxs 的关键区域结合，消除毒性。下列说法错误的是（ ）
A．S 在高温下仍能保持折叠结构和活性，更利于运输和存储
B．S 较普通抗体小，组织渗透性强，可快速起效
C．S 与细胞因子、溶菌酶等均属于免疫活性物质
D．S 与3FTxs 高度亲和，可有效阻止毒素与神经递质受体结合
【答案】C
【分析】1、免疫系统：
免疫器官：骨髓、胸腺等。
免疫细胞：树突状细胞、巨噬细胞、淋巴细胞。
①
②
其中B 细胞在骨髓中成熟、T 细胞在胸腺中成熟。
免疫活性物质：抗体、淋巴因子、溶菌酶。
③
2、免疫系统三大功能：
免疫防御，针对外来抗原性异物，如各种病原体。
免疫自稳，清除衰老或损
①
②
伤的细胞。
免疫监视，识别和清除突变的细胞，防止肿瘤发生。
③
3、三道防线：非特异性免疫，包括第一道防线和第二道防线。第一道防线：皮肤，黏膜等；第二道防线：
体液中的杀菌物质（溶菌酶）、吞噬细胞（如巨噬细胞和树突状细胞）。特异性免疫，也即第三道防线：
体液免疫和细胞免疫。
【详解】A、S 具有热稳定性高的特点，因此在高温下仍能保持折叠结构和活性，更利于运输和存储，A
正确；
B、迷你蛋白S 体积较小，组织渗透性优于普通抗体，可快速起效，B 正确；
C、免疫活性物质（如抗体、细胞因子、溶菌酶）需由免疫系统或其他细胞产生，而S 是人工设计的蛋白
质，不属于机体自身免疫活性物质，C 错误；
D、S 通过与3FTxs 关键区域结合，可阻断其与烟碱乙酰胆碱受体结合，从而消除毒性，D 正确；
二、多选题
5．（2025·黑龙江·一模）AIGC(人工智能生成内容)技术走进生命科学，科学家利用TRDiffusion 模型模拟
蛋白质三维结构的
生成
“
-优化
过程，直接从零开始设计自然界中不存在的新型蛋白质。下列关于蛋白质
”
设计的叙述，正确的是（ ）
A．人工设计的蛋白质可能含有氨基酸残基以外的组分(如金属离子或糖链)
B．直接利用该模型设计的蛋白质无需基因表达，可通过体外合成技术大量生产
C．设计过程中需模拟脱水缩合以形成特定肽键和二硫键结构
D．通过精准调控蛋白质的三维空间结构，可实现对其生物学功能的定向设计
【答案】AD
【分析】蛋白质工程是指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，
对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要，其核心是基因工
程。
【详解】A、蛋白质可能与其他分子(如辅酶、金属离子等)结合，形成复合物。糖蛋白和血红蛋白说明蛋白
质中可含有有机物和无机盐离子，A 正确；
B、通过模型设计出蛋白质结构，其大规模生产仍需借助基因工程(如构建表达载体)和细胞培养技术，体外
合成成本高且效率有限，B 错误；
C、肽键是脱水缩合形成的结构，但二硫键由巯基氧化脱H 形成，与脱水缩合无关，C 错误；
D、蛋白质功能由其空间结构决定，TRDiffusion 模型通过设计特定结构，可定向实现预期功能(如催化、结
合靶点)，体现了
结构决定功能
的核心生物学原理，
“
”
D 正确。
6．（2025·黑龙江·一模）皂苷是分布广泛且结构复杂的天然产物，具有多种生物活性。乙酰化是皂苷最常
见的修饰之一，对提高其生物活性起着重要作用。皂苷乙酰化最有可能由酰基转移酶（ATs）催化，天然
的ATs 催化效率较低，研究人员利用蛋白质工程技术改良了ATs，大大地提高了其催化效率。下列叙述正
确的是（ ）
A．该技术不能通过直接改造ATs 的结构来提高其催化效率
B．根据ATs 的氨基酸序列就能准确推出相应的脱氧核苷酸序列
C．该技术的实施需要限制酶、DNA 连接酶以及载体等工具
D．该技术难度很大，因为蛋白质发挥功能必须依赖复杂的空间结构
【答案】ACD
【分析】基因工程过程包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因
的检测与鉴定。一个完整的基因表达载体包括：目的基因、启动子、终止子、标记基因。蛋白质工程指以
蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改
造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要。蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸
出来的第二代基因工程。
【详解】A、蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或
基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。所以可以
通过改造编码ATs 的基因，进而改造ATs 的结构来提高其催化效率，A 正确；
B、由于密码子的简并性，一种氨基酸可能由多种密码子编码，所以根据ATs 的氨基酸序列不能准确推出
相应的脱氧核苷酸序列，B 错误；
C、蛋白质工程的实施过程中，需要对基因进行修饰或合成，这就需要限制酶、DNA 连接酶以及载体等工
具，C 正确；
D、B、蛋白质结构复杂，功能多样，蛋白质工程难度很大的主要原因是蛋白质的功能必须依赖其复杂的
空间结构，D 正确。
三、解答题
7．（2025·黑龙江·一模）CD87 是一种癌细胞膜上的受体蛋白，与癌细胞的转移和增殖有关。研发针对
CD87 的抗体类药物能提高癌症的治愈率。
(1)单克隆抗体制备过程如图所示，其中HAT 培养基用于筛选杂交瘤细胞。
细胞
表示小鼠的
①
细胞，获取杂交瘤细胞后，需在全营养培养基中培养一段时间，目的是
。经过筛选的杂交瘤细胞可通过注入小鼠腹腔或在培养液中进行扩大培养并不断产生单克隆抗体。
(2)双特异性抗体是指同时具有两种抗原结合位点的人造抗体，研究人员利用基因工程等技术制备具有CD3
和CD87 结合位点的双特异性抗体(见图2)。备注：CD3 是T 细胞表面特异性抗原，在所有T 细胞膜上均有
表达，该抗原被激活后，能极大促进T 细胞的免疫效力。
设计目的基因序列：通过查阅基因数据库，获得
①
CD3 和CD87 蛋白对应的碱基序列和氨基酸序列，为使
两种抗体蛋白能结合形成有功能的抗体，利用计算机辅助设计技术，进行蛋白质工程，其基本流程是
。蛋白质工程的基础是 。
获取目的基因：利用
②
获取目的基因后，通过PCR 扩增，采用的引物如图3 所示。
构建重组质粒：选用含
③
LacO 位点的质粒作为载体。LacO 位点常与阻遏蛋白(LacⅠ基因表达产物)结合，
阻止RNA 聚合酶的移动，环境中的乳糖能解除阻遏蛋白的作用。将目的基因与质粒连接，形成图4 所示
的重组质粒。LacO 位点的作用是 。
酶
识别序列
EcoRⅠ
5＇-G^AATTC-3
＇
BgⅢ
5＇-A^GATCT-3
＇
BamHⅠ
5＇-G^GATCC-3
＇
XhoⅠ
5＇-C^TCGAG-3
＇
备注：“^”表示酶切位点
重组质粒的导入和检测：将重组质粒与经
④
CaCl2处理的大肠杆菌共培养一段时间后，将菌种接种在含四
环素的培养基中培养，获得的大肠杆菌需鉴定是否含有重组质粒，原因是 。提取大肠杆菌总
DNA 后，根据表中4 种限制酶的识别序列，采用 酶进行酶切，电泳后若存在 bp 左右长
度的条带，则说明导入了重组质粒。
双特异性抗体的生产：将筛选出的大肠杆菌扩大培养后，接种在发酵罐中进行大规模发酵。
⑤
(3)相对于单克隆抗体，图示双特异性抗体在治疗癌症时的效果更好，推测原因是 。
【答案】(1) （已免疫的）B 淋巴 (扩大培养)增加杂交瘤细胞数量
(2) 从预期蛋白质的功能出发
设计预期蛋白质结构
推测应有的氨基酸序列
找到并改变相对应的
→
→
→
脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因
获得所需要的蛋白质 蛋白质分子结构规律及其与生物功能之
→
间的关系 人工合成 调控目的基因的转录 含有空质粒和质粒与质粒连接产物的大肠杆菌也
能在含四环素的培养基中存活 BamHI 和XhoI 1150
(3)该双特异性抗体既能结合癌细胞表面的受体蛋白CD87，又能结合T 细胞表面的特异性抗原CD3，且
CD3 抗原被激活后，能极大促进T 细胞的免疫效力，从而实现定向杀伤癌细胞作用
【分析】单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B 细胞，将效应B 细
胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培
养），最后获取单克隆抗体。诱导动物细胞融合的方法有：物理法（离心、振动）、化学法（聚乙二醇）、
生物法（灭活的病毒）。
【详解】（1）单克隆抗体制备过程中，利用可以无限增长的骨髓瘤细胞与能产生特定抗体的已免疫的B
淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞，经过多次筛选，可获得既可产生特定抗体，又可无限增殖的杂交瘤细胞，
因此故细胞
表示经过免疫的小鼠
①
B 淋巴细胞；在全营养培养基中，细胞可获得其生长发育所需的全部营
养物质，容易存活增殖，因此获取杂交瘤细胞后，需在全营养培养基中培养一段时间，目的是扩大培养增
加杂交瘤细胞数量。
（2）
天然蛋白质合成的过程是按照中心法则进行的：基因
表达（转录和翻译）
形成具有特定氨基
①
→
→
酸序列的多肽链
形成具有高级结构的蛋白质
行使生物功能。而蛋白质工程却与之相反，它的基本思路
→
→
是：从预期的蛋白质功能出发
设计预期的蛋白质结构
推测应有的氨基酸序列
找到并改变相对应的脱
→
→
→
氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因
获得所需要的蛋白质；蛋白质工程的目标是根据人们对蛋白质功
→
能的特定需求，对蛋白质的结构进行设计改造，蛋白质的结构决定蛋白质的功能，故蛋白质工程的基础是：
蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系。
根据题意，这里的目的基因是根据设计的蛋白质结构，推测出应有的氨基酸序列，再找到目的基因的碱
②
基序列，因此获取目的基因的方法是根据目的基因的碱基序列利用人工合成法获取目的基因后，通过PCR
扩增。
根据题意，
③
LacO 位点常与阻遏蛋白结合，阻止RNA 聚合酶的移动，环境中的乳糖能解除阻遏蛋白的作
用，由此可见LacO 位点的作用是调控目的基因的转录。
题图中，
④
terr是四环素抗性基因，因含有空质粒和质粒与质粒连接产物的大肠杆菌也含有四环素抗性基因，
也能在含四环素的培养基中存活，故在含四环素的培养基中培养一段时间获得的大肠杆菌需鉴定是否含有
重组质粒；对比引物1 和引物2 虚线框序列和4 种限制酶识别可知，引物1 中含有BamHⅡ的识别序列5'-
GGATCC-3'，引物2 中含有XhoⅠ的识别序列5'-CTCGAG-3'，因此采用BamHI 和XhoI 酶进行酶切；因目
的基因长度为1140bp，用BamHⅡ切割图中目的基因（包含引物1 序列）的左端后，在长度为1140 的目的
基因的左端多出14 个脱氧核苷酸，即7 对含氮碱基，在目的基因的右端（含引物2 所含序列）用XhoⅠ切
割后，在原目的基因的右端之后多出6 个脱氧核苷酸，即多出3 个碱基对，因此电泳后若存在
1140+7+3=1150bp 左右长度的条带，则说明其含有目的基因，即导入了重组质粒。
（3）相对于单克隆抗体，图示双特异性抗体具备CD3 和CD87 结合位点，其中CD3 是T 细胞表面特异性
抗原，在所有T 细胞膜上均有表达，因此双特异性抗体既可特异性结合T 细胞表面的CD3，该抗原被激活
后，能极大促进T 细胞的免疫效力，又能特异性结合癌细胞表面的受体蛋白CD87，从而实现定向杀伤癌
细胞作用，在治疗癌症时取得更好的效果。
