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专题19 细胞工程
考点概览
考点01 细胞工程
考点02 单克隆抗体的制备
细胞工程
1．（2024·四川攀枝花·一模）成体组织细胞能够被用于两种不同意义的“克隆”，具体流程如图所示。下
列有关克隆的叙述正确的是（ ）
A．图中含“纺锤体”的细胞为MⅡ期卵母细胞，图中代孕母体不需要处理即可植入胚胎
B．经“细胞融合”形成的重组细胞中，细胞质中的遗传物质仅来自成年母体的卵母细胞
C．图中“早期胚胎”内部的空腔为囊胚腔，图中两种“克隆”均需要胚胎移植过程
D．图中成体组织细胞需要培养，在培养前可用机械方法或用胰蛋白酶处理一段时间
2．（2024·四川眉山·一模）五小叶槭是中国珍稀濒危野生植物。研究人员以五小叶槭带芽茎段为外植体，
筛选出五小叶槭外植体的最佳消毒处理方案、茎段诱导生芽和生根的最佳培养基，建立了五小叶槭快
速繁殖体系，为保护五小叶槭提供了重要繁育技术手段。下列叙述错误的是（ ）
A．该快速繁殖体系可以保持五小叶槭的遗传特性
B．不同消毒处理方法对外植体会产生不同的影响
C．茎段诱导生芽和生根的培养基中物质比例不完全相同
D．愈伤组织诱导生根后再转接到生芽的培养基上
考点01
3．（2024·四川攀枝花·一模）花椰菜（2n=18）种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，紫罗兰（2n=14）具有
一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1 所示。通
过蛋白质电泳技术分析了亲本及待测植株中某些特异性蛋白，结果如图2 所示。下列有关叙述正确的
是（ ）
A．图1 培育杂种植株所用的技术体现了细胞膜具有一定流动性原理和基因突变原理
B．②过程可用电融合法或灭活病毒诱导细胞融合，杂种细胞再生出细胞壁是成功的标志
C．图1 培育出的植株体细胞中最多含有72 条染色体，减数分裂时最多可形成18 个四分体
D．可将病菌悬浮液均匀喷施于图2 中的3 和5 植株叶片上，一段时间后，测定病斑面积占叶片总面积
的百分比，筛选出抗病性强的杂种植株
4．（2024·四川内江·一模）为研究红霉素（EM）联合顺铂（CDDP）用药对肺癌细胞增殖、凋亡的影响，
科研人员将肺癌细胞均分成四组进行不同实验处理，实验结果如下表。下列有关叙述正确的是
（ ）
组别
分裂间期的细
胞比例（%）
细胞凋亡率
（%）
细胞周期蛋白
相对表达量
细胞凋亡蛋白
相对表达量
空白对照组
89.12
0.46
0.89
0.41
10mg/LEM 组
91.37
0.51
0.76
0.73
IC50-CDDP 组
93.93
16.08
0.84
0.42
10mg/LEM+IC50-CDDP
组
96.61
19.71
0.75
0.75
注：IC50（半数抑制浓度）是指能将细胞生长、增殖等抑制50%所需的浓度。
A．培养肺癌细胞时，无需向培养液添加经灭菌处理的动物血清
B．肺癌细胞在悬浮培养时会因细胞密度过大出现接触抑制现象
C．肺癌细胞的细胞凋亡率与细胞凋亡蛋白相对表达量呈正相关
D．联合用药可降低细胞周期蛋白相对表达量，进而增强抑癌效果
5．（2024·四川德阳·一模）豆科植物根部的瘤状物是根瘤菌侵入豆科植物根内引起的。根瘤菌具有固氮能
力，为了验证根瘤菌的固氮作用，某兴趣小组做了相关实验。下列说法错误的是（ ）
A．甲是分离和培养根瘤菌得到的纯培养物
B．①表示脱分化，没有基因的选择性表达
C．②表示再分化，培养基的配方与①不同
D．若发生杂菌污染则难以获得目的试管苗
6．（2024·四川德阳·一模）十字花科植物甲（2n=20）与乙（2n=16）通过人工授粉杂交，获得的幼胚经组
织培养形成幼苗丙，用秋水仙素处理丙的幼芽形成幼苗丁，待丁开花后自交获得后代戊若干下列叙述
正确的是（ ）
A．在形成幼苗丙的过程中，需要先去细胞壁再进行原生质体融合
B．在幼苗丁细胞分裂后期，可以观察到36 或72 条染色体的细胞
C．由丁培育戊、打破了生殖隔离、克服了远缘杂交的不亲和障碍
D．甲、乙杂交的受精卵，因没有同源染色体而不能进行有丝分裂
7．（2024·四川成都·一模）随着动物细胞工程和胚胎工程的迅猛发展，用引进的良种奶牛大量、快速繁殖
满足了我国对奶类的大量需求。下图表示畜牧业生产上培育某种优良种牛的两种方法，相关分析错误
的是（ ）
A．通过方法I、Ⅱ培育优良种牛E 和F 的本质都是有性生殖
B．方法I 中B 牛的卵子需培育到MⅡ期才具备与精子受精的能力
C．在卵细胞膜和透明带的间隙观察到两个极体可作为受精的标志
D．方法I、Ⅱ获得的胚胎通常需培养至囊胚阶段再移植入D 牛的子宫内
8．（2024·四川泸州·一模）小鼠的皮肤细胞能在一定条件下转化为能够再分化的干细胞 干细胞可用于治
疗某些疾病。下图是实验小鼠皮肤细胞培养的基本过程，下列有关叙述正确的是（ ）
A．图中甲→丁过程均需要营造一个无菌、无毒、无氧的环境
B．乙过程用胰蛋白酶或胃蛋白酶处理，可以获得单个细胞
C．丙和丁培养过程中，一般会在培养瓶壁上形成单层细胞
D．丙过程细胞完成1 次有丝分裂，丁过程细胞完成多次有丝分裂
9．（2024·四川泸州·一模）生物碱是一类碱性含氮化合物，它不是植物生长必需的物质，在植物体内含量
少，有治疗疾病的作用，可从植物中获取。下图是以铁皮石斛为材料，运用组织培养技术培养拟原球
茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程。下列有关叙述正确的是（ ）
A．为了提高PLB8 的诱导率，诱导时应注意严格灭菌并提供光照
B．图中过程①为脱分化形成PLBs，过程②为再分化生产生物碱
C．生物碱为铁皮石斛的次生代谢物，主要在③阶段合成并提取
D．若细胞数量/生物碱产量的值越大，则该细胞系为高产细胞系
10．（2024·四川内江·一模）研究人员用紫外线照射耐盐性强的中间偃麦草甲的原生质体，使其染色体断
裂。再诱导其与普通小麦乙原生质体融合，经培养、筛选获得了耐盐小麦新品种丙（染色体数目与乙
相同）。下列有关叙述错误的是（ ）
A．用纤维素酶和果胶酶处理甲、乙体细胞可获得原生质体
B．植物体细胞杂交过程中常用灭活病毒诱导原生质体融合
C．培育过程中适当提高培养基中生长素比例有利于根的分化
D．据题意推测，丙染色体上可能整合了甲染色体的染色体片段
11．（2024·四川南充·一模）在保护粤东黑猪猪种遗传资源各项生物技术中，体细胞核移植技术因具有继
承亲本性状完整、实验周期短、保种效力强的优点而备受关注，下图为部分相关操作流程。据图分析
正确的是（ ）
A．卵母细胞需在卵巢中成熟后再移除核
B．5%CO2的主要作用是维持培养液的pH
C．重构胚的遗传物质完全来自粤东黑猪
D．该技术证明了动物体细胞具有全能性
12．（2024·四川南充·一模）五小叶槭是中国珍稀濒危野生植物。研究人员以五小叶槭带芽茎段为外植体，
筛选出五小叶槭外植体的最佳消毒处理方案、茎段诱导生芽和生根的最佳培养基，建立了五小叶槭快
速繁殖体系，为保护五小叶槭提供了重要繁育技术手段。下列叙述错误的是（ ）
A．该快速繁殖体系可以保持五小叶槭的遗传特性
B．不同消毒处理方法对外植体会产生不同的影响
C．茎段诱导生芽和生根的培养基成分不完全相同
D．愈伤组织诱导生根后再转接到生芽的培养基上
13．（2024·四川巴中·一模）2023 年11 月，我国科研人员利用食蟹猴培育出世界首只胚胎干细胞高贡献的
活体嵌合猴，该研究部分过程如图所示，由于供体猴胚胎干细胞在体外培养和妊娠期间高度嵌合于受
体胚胎，使得后代活体嵌合猴的各种组织中，高达90%的细胞来源于供体胚胎干细胞。下列有关叙述
正确的是（ ）
（注：GFP 指表达绿色荧光标记蛋白，可监测供体干细胞的存活情况以及其在嵌合体不同组织中的分
化、分布情况。）
A．具有清晰GFP 信号的囊胚才能被转移至代孕雌猴体内，否则难以获得嵌合猴
B．代孕雌猴在移植嵌合囊胚前，需要饲喂含促性腺激素的饲料进行同期发情处理
C．由图可知，代孕雌猴分娩的嵌合猴体细胞中，核遗传物质的一半来源于代孕雌猴
D．图示过程中涉及动物细胞培养、体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等工程技术
14．（2024·四川巴中·一模）罕见草药红景天体内的次生代谢物Sal（红景天苷）具有重要药用价值。由于
稀有草药供应不足，科研人员研究了不同光照条件对红景天愈伤组织生长和Sal 产生的影响，旨在寻
找提高红景天体外培养产量的新途径。研究人员首先取红景天叶片诱导出愈伤组织，过程如图1 所示，
随后分别在红光、蓝光、绿光、RGB 光（红、绿、蓝混合光）和白光的不同光照条件下培养红景天愈
伤组织，并定期统计，结果如图2 所示。下列叙述正确的是（ ）
A．外植体需分别用70%乙醇和10%次氯酸钠进行消毒，随后用自来水清洗多次
B．图1 培养基中NAA 和细胞分裂素的配制比例适中时容易诱导外植体形成愈伤组织
C．接种的外植体经脱分化诱导形成愈伤组织的过程，体现了植物细胞的全能性
D．由上图可知，不同光照条件会影响红景天Sal 的积累量，红光下最有利于Sal 积累
15．（2024·四川眉山·一模）我国科学家通过培育小鼠孤雌单倍体胚胎干细胞，成功获得了“1 母亲0 父
亲”的雌性小鼠，且能正常生殖产生后代，这在世界上属首例，其有关技术路线如下图。请分析回答：
(1)为了获得更多的卵母细胞，研究人员需对母鼠进行超数排卵处理，该过程中用到的动物激素是
。
(2)在第1 阶段体外构建孤雌单倍体胚胎干细胞时，应将取自囊胚的 分散后制成细胞悬液，置于
含有 的混合气体的培养箱中进行细胞培养；在第2 阶段原核形成时卵母细胞已完成了减数分裂，
理由是 。
(3)该研究团队将精子注入去核的MII 期的卵母细胞，最后培养出孤雄单倍体胚胎干细胞，这里去掉的
“核”是指 。
(4)印记基因包括父系印记基因和母系印记基因，是可以区分精子和卵细胞的基因组。Rasgrf1 基因是
小鼠细胞中的父系印记基因，正常情况下来自父本的该基因处于不表达状态。研究发现，这种不表达
状态与基因的某种表观遗传调控相关。为获得孤雌生殖的个体，对Rasgrf1 基因进行的最佳处理方式
是 （填序号）。
①甲基化修饰②去甲基化③敲除④诱导突变
16．（2024·四川成都·一模）普通小麦即六倍体小麦（AABBDD）是由一粒小麦（2A=14）、山羊草
（2B=14）、节节草（2D=14）培育而来的，六倍体小黑麦（AABBRR）是由一粒小麦（2A=14）、
山羊草（2B=14）、黑麦（2R=14）培育而来的。已知某品系的六倍体小黑麦含抗病基因（受显性基
因H 控制），且位于R 染色体组的6 号染色体（6R）上。研究人员计划通过图示流程，培育抗病的六
倍体小麦。回答下列问题：
注：A、B、D、R 分别代表一粒小麦、山羊草、节节草、黑麦的染色体组。
(1)图示过程是 （填“杂交”或“多倍体”）育种，F1的染色体组成是 。
(2)F1具有较多的黑麦特征，需要以F1为父本、以矮秆普通小麦为母本实施多次回交，筛选出与普通小
麦性状相似、矮秆且具有抗病能力的Fn。已知普通小麦的高秆、矮秆受等位基因（T、t）控制，该基
因位于A 染色体组的6 号染色体（6A）上。研究人员还发现，H 基因能从6R 上易位到普通小麦的染
色体上，出现以下四种类型的Fn。
研究人员计划通过实验，筛选出以上类型的六倍体小麦。
实验一：随机选取Fn植株若干，在扬花期采集花粉母细胞。使用光学显微镜观察 （填时期）的
花粉母细胞，通过比较配对染色体形态，筛选出基因H 分布情况为Ⅲ的植株。
实验二：以纯种高秆不抗病六倍体小麦为母本，与部分Fn杂交，得到Fn+1。
选取Fn+1中的 （填表型）个体进行自交。若Fn+2的表型及比例为 ，则基因H 分布情况为Ⅳ。
实验三：以位于 （填“6A”“6D”或“任意”）染色体的某已知基因控制的性状为参照对象，重复
实验二的步骤，可以筛选出基因H 分布情况为I 的植株。
(3)
某科创小组计划以黑麦（RR）和普通六倍体小麦（AABBDD）为原材料，使用植物细胞融合技
术培养具有抗病性的八倍体小麦（AABBDDRR）。他们须先用酶去除植物细胞壁，获得原生质体，
再用 法（答出1 种具体方法即可）人工诱导原生质体融合，融合后得到的杂种细胞再经诱导脱
分化形成 ，并进一步发育成完整的杂交植株。
单克隆抗体的制备
1．（2024·四川内江·一模）犬瘟热（CD）是由犬瘟热病毒（CDV）感染引起的多种动物共患的高度接触
性传染病，具有高发病率、高死亡率的特点。F 蛋白是CDV 的一种表面膜蛋白，制备抗CDV 的F 蛋白
的单克隆抗体对CD 的检测与治疗具有重要意义，科研人员对其展开了相关研究，部分操作流程如下。
回答下列问题：
(1)F 蛋白抗原的制备：
①利用下列引物（引物中含酶切位点）扩增F 蛋白基因（基因长度771bp）
上游引物CDV-F-F：5'-CCGGAATTCATAGCTTTACATCAGTCAAA-3'
下游引物CDV-F-R：5'-CCGCTCGAGAGCACAATTTGCAACGATA-3'
此过程中引物的作用是 。
②利用pET-28a 质粒与扩增的F 蛋白基因构建基因表达载体。
考点02
结合上述信息，若构建基因表达载体时，目的基因和质粒均采用两种限制酶切割，则应该选择的限制
酶是 。
③将目的基因导入大肠杆菌，转化后的大肠杆菌应采用含有 的培养基进行筛选。若从该培养
基上分离出某大肠杆菌，提取其质粒，利用上述两种酶切割后进行电泳，其结果如图（M 为标准样
品），则说明该大肠杆菌导入的是 （填“目的基因未插入成功的”或“重组”）质粒。
④将成功导入重组质粒的大肠杆菌进行超声裂解，对裂解后的菌液进行离心、纯化，获得CDV 重组F
蛋白。
(2)抗CDV 的F 蛋白的单克隆抗体制备，其流程如图所示：
①取已免疫小鼠的脾脏组织剪碎，用 处理后，加入培养液可制成B 淋巴细胞悬液。诱导B 淋
巴细胞与骨髓瘤细胞融合常用的化学试剂是 ，该过程依据的原理是 。
②经HAT 培养基筛选的杂交瘤细胞，通过96 孔板克隆化培养，可利用 技术检测并筛选出特
异性杂交瘤细胞，注入到小鼠腹腔内增殖，待小鼠腹腔臌胀时收集腹水，离心、纯化获取大量抗CDV
的F 蛋白的单克隆抗体。
(3)结合以上信息，请尝试给“单克隆抗体”下定义。即单克隆抗体是指 。
2．（2024·四川内江·一模）黄芩素（BAI）目前被证实是具有低毒性、高效性的潜在的安全抗肿瘤药物之
一。MicroR-NA-7-5p（某微小RNA，简写为miR-7）被认为是肿瘤抑制因子，在胃癌、肝癌等癌症中
表达下调。研究发现，BAI 可能通过调控miR-7 来对人胃癌细胞自噬产生影响。回答下列问题：
(1)为探究BAI 通过miR-7 来调控人胃癌细胞自噬可能的机制，研究人员先将人胃癌细胞悬液均分为两
组，一组作对照，另一组用适宜浓度的BAI 处理，然后置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2
恒温培养箱中培养，从细胞中提取总RNA，经有关酶处理后，利用PCR 技术实时定量荧光检测miR-7
相对表达量，结果如图1.
①混合气体中CO2的主要作用是 ，上述“有关酶”是指 。
②分析实验结果，可得出的结论是适宜浓度的BAI 。
(2)有研究表明，BAI 通过调控miR-7 表达量对人胃癌细胞自噬的影响，可能与PI3K/AKT/mTOR 信号
通路相关，该通路最终可通过激活mTOR 来抑制细胞自噬的发生，而PI3K、AKT、mTOR 三种蛋白
质需通过磷酸化被激活。在上述实验的基础上，研究人员又将人胃癌细胞分为对照组、miR-7 组
（miR-7 表达增强组）及BAI 组进行了实验，并测得其PI3K、AKT、mTOR 蛋白的磷酸化水平，结果
如图2.
①结合图2 实验结果可知：BAI 是通过 ，进而促进细胞自噬。
②激烈的细胞自噬会引起细胞凋亡而抑制肿瘤细胞的增殖。但有人认为，细胞自噬可能会促进肿瘤细
胞的生长，请结合所学知识，简述该观点的合理性： 。
(3)综上分析，BAI 抗肿瘤的机制可能是 。
3．（2024·四川成都·一模）研究发现，蛋白酶抑制剂（一种蛋白质）可抑制害虫胰蛋白酶活性，从而使害
虫不能正常消化食物以达到抗虫的目的，因此蛋白酶抑制剂基因转化方式成为作物抗虫育种的新途径。
某研究团队将胰蛋白酶抑制剂（NaPI）基因转入棉花，获得了转基因棉花植株，其部分操作流程如下
图所示。已知EcoR I 和BamH I 是两种限制酶。回答下列问题：
(1)利用PCR 技术扩增NaPI 基因时，要添加 酶，该酶需要在反应的缓冲液中添加 （填一种
无机盐离子）来激活。
(2)基因工程的核心步骤是该图中的 （填序号）。利用农杆菌转化法时需要将NaPI 基因插入到Ti
质粒的T-DNA 上，原因是 。
(3)在分子水平上，研究团队可用 （写出1 种即可）技术检测NaPI 基因在棉花愈伤组织细胞中的
整合，然后经过基因表达的检测，筛选出能合成胰蛋白酶抑制剂的棉花细胞，再通过 技术，即
可得到转基因抗虫植株。
(4)研究发现，胰凝乳蛋白酶抑制剂（StPinlA）也能起到抗虫的效果。研究团队做了相关实验（“对
照”指的是非转基因棉花），得到如下图所示的实验结果：
据图分析，研究团队的实验思路是：将NaPI 基因和StPinlA 基因 ，然后检测虫体质量及每株棉
铃数。根据实验结果，若想要得到抗虫效果最佳的转基因棉花，你的建议是 。
4．（2024·四川泸州·一模）“人造精子”是一种可替代精子使卵细胞“受精”的单倍体胚胎干细胞。科学
家将某种动物单倍体胚胎干细胞注射到卵细胞中成功培育出健康的该种动物。该技术不仅为动物模型
的获得提供了新手段，同时也为动物生殖、遗传与发育调控机理研究提供了新思路。右图是科研人员
利用胚胎操作技术，通过两种方式获得重组细胞，进而培育出该种动物“人造精子”的流程。请回答
下列问题：
(1)方式一成功获得“人造精子”的关键操作是及时去除 的细胞核。
(2)方式二中选择卵母细胞作为受体细胞的原因是卵母细胞具有 （答两点）的优点，操作中
注入完整的精子而非精子的细胞核，原因是 。
(3)目前，构建成功的该动物单倍体胚胎干细胞系，均为性染色为X 染色体的细胞系，无法获得性染色
体为Y 的单倍体胚胎干细胞系，这与该生物Y 染色体比X 染色体短小有关。据此推测可能的原因是
。若将成功构建的“人造精子”与卵细胞结合繁殖正常的二倍体动物，该动物的性别是 。
5．（2024·四川德阳·一模）切块后的马铃薯暴露在空气中易发生酶促褐变，引起色泽，风味，质构等变化，
降低营养价值，甚至存在安全隐患。多酚氧化酶是引起马铃薯酶促褐变的主要酶。研究人员利用
CRISPR/Cas9 基因编辑技术获得多酚氧化酶基因敲除的转基因马铃薯植株。分析回答：
(1)根据图1 分析可知，Cas9 蛋白与SgRNA 形成的复合体的功能相当于基因工程中 酶的功能。
(2)基因敲除表达载体PKSE402 中35SP 是启动子，eGFP 基因编码绿色荧光蛋白，推测eGFP 基因在图
1 中的作用是 。
(3)在实际生产中，多酚氧化酶基因敲除的马铃薯长期无性繁殖后，很容易感染pvx 病毒并将病毒传给
后代，导致作物产量降低，品质变差。请你利用植物细胞具有全能性的原理解决这一问题：
。
(4)进一步研究发现，MAP30 蛋白具有抗pvx 病毒功能，为培育高效表达该基因的马铃薯新品种，科
研团队利用农杆菌转化法将MAP30 基因导入马铃薯细胞内，如图2 所示：
选择Ti 质粒作载体的原因是 ，构建基因表达载体时应选择 识别并切割质粒。从分子水平
上，检测转基因马铃薯是否具有抗病毒的特性，可用 的方法。
6．（2024·四川南充·一模）猴痘是由猴痘病毒（MPXV）引起的人畜共患病。A29L 蛋白是MPXV 的囊膜
蛋白，参与识别宿主细胞，促使病毒与宿主细胞融合。研究员为制备抗MPXVA29L 单克隆抗体，进行
了如下实验。请回答下列问题：
(1)图中过程①是给小鼠注射 ，从而获得已免疫的B 淋巴细胞；为使该细胞与骨髓瘤细胞进行融
合，可在A 中加入化学物质 ，一段时间后，A 中除融合的杂交瘤细胞外，还应该有
。
(2)在培养皿B 中加入了特定的选择培养基，其目的是 。将从B 中获得的细胞在96 孔板上
进行 ，经多次筛选，就可在C 中获得足够数量的能产生抗MPXVA29L 的杂交瘤细胞。将能产
生抗MPXVA29L 的杂交瘤细胞进行大规模培养，除图中方法外，还可以进行 。
(3)本研究得到的抗MPXVA29L 单克隆抗体的用途有 。
7．（2024·四川成都·一模）科研人员利用野生型二倍体马铃薯（2N=24）和抗青枯病的二倍体茄子
（2N=24）进行体细胞杂交，培养抗青枯病马铃薯。
(1)自然界马铃薯和茄子之间存在 ，难以通过有性生殖产生后代。
(2)将马铃薯和茄子的原生质体融合，可采用 诱导的化学方法。融合细胞在培养基中
培养，培养基中需要加入 ，促进形成愈伤组织和再分化形成杂种植株。
(3)科研人员用流式细胞仪（可测定植物细胞的DNA 含量）进一步测定马铃薯和茄子和杂种植株B 的
DNA 的相对含量，结果如下图：
依据上述结果预测，马铃薯-茄子融合后细胞的DNA 含量约为 。根据图推测，杂种
植株B 应该由 个细胞融合而来，判断的依据是 。
(4)为确定杂种植株是否符合育种要求，还需对其进行 检测
8．（2024·四川成都·一模）非洲猪瘟是由ASFV（一种双链DNA 病毒）感染猪引起的烈性传染病。某研
究小组将ASFV 外壳蛋白基因导入猪体细胞中，利用核移植技术培育转基因克隆猪，从而得到自动产
生ASFV 抗体的个体，其过程如图所示。回答下列问题：
(1)获得D 猪的基础技术是 ，取B 猪体细胞进行①过程相对于胚胎细胞难度大，原因
在于 ，步骤③采用的技术手段是 。
(2)B 猪体细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期更换培养液以防止细
胞代谢物积累对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程
称为 。
(3)在导入目的基因之前，需要用双酶切法处理含目的基因的DNA 片段和质粒，其优点是
（答出一点即可）。
(4)利用抗原一抗体杂交技术判断D 猪是否产生ASFV 抗体，使用的抗原物质最好是 。
该抗体也可以使用杂交瘤技术来制备，通常情况下，杂交瘤细胞是由骨髓瘤细胞和
细胞融合获得的。
