根农杆菌有关的基因工程习题

20.(12 分) 玉米青枯病会导致玉米茎基腐烂而死，常被种植户称为 “暴死病”。我国玉米青枯病主要由欧文氏菌侵染引起。科研人员对玉米进行改造，转入马铃薯的RI基因，使其具有抗欧文氏菌的能力，改造过程所用的质粒和目的基因如图所示。回答下列问题：

(1) 质粒是____，其中启动子的作用是____。

质粒是（裸露的，结构简单）独么于细胞核或者拟核之外的，并且具有自我复制能力的双链DNA分子；RNA聚合酶识别并结合的部位，驱动目的基因转录；

(2) 构建基因表达载体：为使目的基因定向插入质粒中，切割质粒所用的限制酶为____。为便于质粒和目的基因正确连接，在利用 PCR 技术扩增 RI 基因时需要设计特定的引物，据图分析，RI 基因左边引物要包括的碱基序列 5'-____-3'(写 12 个碱基即可)。

HindⅢ和SpeⅠ、HindⅢ和XbaⅠ；AAGCTTCACTAG;

(3) 欲鉴别重组质粒 (表达载体) 是否导入农杆菌中，一同学认为在农杆菌培养基中添加新霉素即可，请对该方案做出评价：____。

该方案无法区分导入空载体质粒的农杆菌和导入重组质粒的农杆菌

(4) 当双子叶植物受伤时，伤口处细胞分泌的酚类化合物会诱导农杆菌趋化移动，最终使目的基因进入受体细胞，而玉米为单子叶植物，欲利用农杆菌转化法将目的基因导入玉米中，需在农杆菌和受体细胞混合液中添加____。

酚类化合物

(5) 欲鉴定 RI 基因是否导入到受体细胞中，可用____方法鉴定，最终获得的转基因玉米具有抗欧文氏菌特性，但不具备新霉素的抗性，原因是____。

PCR技术或者DNA分子杂交技术；只有T-DNA片段能转移并整合到受体细胞染色体的DNA上，而新霉素抗性基因不在T-DNA片段上；