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专题11 基因工程
考点概览
考点01 基因工程的基本工具
考点02 基因工程的基本操作程序
考点03 基因工程的应用
考点04 基因工程综合
基因工程的基本工具
1．(24-25 高三下·河南湘豫联考·二模)下列关于传统或现代生物技术的叙述，正确的是（ ）
A．DNA 的粗提取与鉴定实验中可利用DNA 不溶于酒精的特点来提纯DNA
B．当果酒发酵结束后，只需打开瓶盖，盖上一层纱布，即可进行果醋发酵
C．克隆动物的培育过程使用了体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等技术
D．通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
【答案】A
【来源】2025 届湘豫名校联考高三第二次模拟生物试题
【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是
醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的
糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、DNA 的粗提取与鉴定实验中利用DNA 不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精的原理，可以初
步分离 提纯DNA，A 正确；
B、制作果酒和果醋实验中，当果酒制作完成后，需打开瓶盖，盖上一层纱布，同时将温度调 至
30~35℃，进行果醋的发酵，B 错误；
C、克隆动物的获得属于无性生殖，未使用体外受精的技术，C 错误；
D、通 过发酵工程可以获得大量的微生物菌体即为单细胞蛋白，其并非从微生物细胞中提取，D 错误。
故选A。
基因工程的基本操作程序
2．(24-25 高三下·河南部分学校·二模)结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，与癌变相关的基因有多个，其
中就包含原癌基因A。研究人员利用DNA 重组技术将突变的原癌基因A 克隆到质粒载体上，用于后续
考点01
考点02
癌症发生机制和癌症治疗的研究。下列说法错误的是（ ）
A．为保证原癌基因A 正确连入，质粒载体上最少需要2 个限制酶切割位点
B．原癌基因A 过量表达而导致相应蛋白质活性过强，就可能引起细胞癌变
C．可利用Ca²⁺转化法将质粒载体导入大肠杆菌或癌细胞内
D．可利用洋葱DNA 粗提取实验的部分步骤提取导入大肠杆菌内的质粒载体
【答案】C
【来源】河南省部分学校2024-2025 学年高三下学期3 月联考（二模）生物试题
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标
记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样；
（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】A、1 个限制酶切割位点可能导致目的基因反向连接，至少需要2 个限制酶切割位点， A 正确；
B、一般来说，原癌基因A 表达的蛋白质是细胞正常的生长和增殖所必需的，这类基因 一旦突变或过量表
达而导致相应蛋白质活性过强，就可能引起细胞癌变，B 正确；
C、Ca2+转化法应用于将质粒载体导入大肠杆菌等微生物细胞，不用于导入动物细胞，C 错误；
D、质粒载体是双链DNA，洋葱DNA 粗提取方法中，乙醇沉淀及高速离心法可用于大肠杆菌内质粒载体
的粗提取，D 正确。
故选C。
3．(24-25 高三下·河南洛平许济·二模)科研人员构建了可表达J-V5 融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该
质粒的部分结构如图甲所示，其中V5 编码序列表达标签短肽V5；该重组质粒在受体细胞内正确表达
后，用抗J 蛋白抗体和抗V5 抗体分别检测相应蛋白是否表达以及表达水平，结果如图乙所示。下列分
析错误的是（ ）
A．作为基因表达载体，图甲中的质粒还必须具有特殊标记基因、复制原点
B．为检测J 基因是否插入到图甲所示的位置，需用引物F1 和R1 进行PCR
C．若J 基因转录的模板链位于b 链，则引物F2 与图甲中a 链相应部分的序列相同
D．图乙中，条带1 的出现证明重组质粒在受体细胞内表达了J-V5 融合蛋白
【答案】B
【来源】2025 届河南省豫西北教研联盟（洛平许济）高三下学期3 月二模生物试卷
【分析】基因工程的关键步骤是构建基因表达载体，基因表达载体主要由启动子、目的基因、标记基因和
终止子组成，其中标记基因用于筛选重组DNA 分子，可以是四环素、氨苄青霉素等抗性基因，也可以是
荧光蛋白基因或产物能显色的基因。
【详解】A、作为基因表达载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因（如抗性
基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，
而且要易从供体细胞分离出来，图甲中有启动子和终止子等，因此质粒还需具备的结构有限制酶的切割位
点、标记基因、复制原点等，A 正确；
B、据图甲可知，引物F1 能与J 基因左端序列配对，引物R2 能与终止子序列配对，因此推测为检测J 基因
是否插入到图甲所示的位置，需进行PCR 检测，若仅用一对引物，应选择图甲中的引物F1 和R2 或F2 和
R1，B 错误；
C、b 是模板链，而根据图上启动子和终止子的位置可知转录方向是图上从左向右，对应的模板链方向应该
是3’-5'，非模板链（也就是a 链）是5'-3'；考虑到DNA 复制的方向是子链的5’-3'，引物基础上延伸的方向
肯定是5'-3'，所以引物结合的单链其方向是3'-5'；图中F2 是后引物，在右侧，所以其配对的单链是3’-5'的
b 链，故其序列应该与a 链相应部分的序列相同，C 正确；
D、据图乙可知，用抗J 蛋白抗体和抗V5 抗体分别检测，均出现条带1，说明条带1 是J-V5 融合蛋白。抗
J 蛋白抗体检测出现条带2，抗V5 抗体检测不出现条带2，说明条带2 所检出的蛋白不是由重组质粒上的
融合的J 基因表达的，D 正确。
故选B。
4．(24-25 高三下·河南信阳高级中学·二模)科学研究中，若已知一种药物或疗法有效，则可将其设置为阳性
对照，以检测新药物或疗法的有效性。下列关于各实验的叙述，错误的是（ ）
A．检测过敏原的实验中，常以组胺注射至皮下作为阳性对照组
B．探究某种新药是否能治疗1 型糖尿病，以给糖尿病模型鼠注射胰岛素作为阳性对照
C．利用PCR 和电泳确认目的基因是否导入成功，阳性对照组样品是目的基因片段
D．探究内环境中是否存在缓冲物质，分别以自来水、肝匀浆作为阳性对照组和实验组材料
【答案】D
【来源】2025 届河南省信阳市浉河区信阳高级中学高三下学期二模生物试题
【分析】阳性对照是一种干预方法，针对“预判结果”而说的。比如一种药物、疗法或医疗器械，这种干
预方法的有效性以前已经是明确的，只是为了说明新疗法的有效性。与阴性对照相比，阳性对照是与要进
行的实验内容很相似但不相同，凡是肯定出现预期结果的组，为阳性对照组。
【详解】A、过敏原可引起过敏反应，组胺是过敏原，注射组胺可引起过敏反应，A 正确；
B、探究某种新药是否能治疗Ⅰ型糖尿病，胰岛素具有降低血糖的功能，可以给糖尿病模型鼠注射胰岛素
作为阳性对照，B 正确；
C、利用PCR 和电泳确认目的基因是否导入成功，阳性对照组样品为目的基因片段，C 正确；
D、探究内环境中是否存在缓冲物质，分别以缓冲液、肝匀浆作为阳性对照组和实验组材料，D 错误；
故选D。
基因工程的应用
5．(24-25 高三下·河南天一大联考·二模)人乳头瘤病毒（HPV）可导致子宫颈癌，HPV 的L1 蛋白在多种类
型的HPV 中均存在，接种二价疫苗对高危型病毒HPV16 与HPV18 的保护效果均达到100%。下列相关
叙述正确的是（ ）
A．免疫防御功能降低使持续感染HPV 的女性易患子宫颈癌
B．HPV 疫苗可以诱导机体中的浆细胞活化并分泌HPV 抗体
C．二价疫苗的保护效果完全取决于机体中相应抗体的水平
D．利用基因工程生产HPV 的L1 可作为HPV 疫苗的设计思路
【答案】D
【来源】2025 届天一小高考高三下学期第三次考试（二模）生物试题
【分析】疫苗是指用各类病原微生物制作的用于预防接种的生物制品。其中用细菌或螺旋体制作的疫苗亦
称为菌苗。疫苗分为活疫苗和死疫苗两种。常用的活疫苗有卡介苗，脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、鼠疫菌
苗等。常用的死疫苗有百日咳菌苗、伤寒菌苗、流脑菌苗、霍乱菌苗等。
【详解】A、持续感染HPV 的女性易患子宫颈癌，主要与其免疫监视功能降低有关，A 错误；
B、HPV 疫苗可诱导B 细胞活化，使其分化为浆细胞，分泌HPV 抗体，浆细胞不能识别HPV 疫苗，B 错
误；
C、二价疫苗的保护效果取决于机体中记忆细胞的数量和相应抗体的水平，C 错误；
D、已知HPV 的L1 蛋白在多种类型的HPV 中均存在，故利用基因工程生产HPV 的L1 或纯化HPV 的L1
可作为HPV 疫苗的设计思路，D 正确。
故选D。
基因工程综合
考点03
考点04
6．(24-25 高三下·河南天一大联考·二模)木糖醇作为一种重要的功能性甜味剂，在食品和医药领域应用广泛。
同源重组法是构建基因表达载体的重要方法，其原理是带有相似序列的DNA 分子之间可以发生同源重
组。某科研小组先将质粒线性化后，分别对木糖醇脱氢酶基因（XDH）、绿色荧光蛋白基因（GFP）
和线性化载体进行PCR 扩增（通过引物引入同源序列），再将得到的目的基因片段和线性质粒片段进
行同源重组，构建表达载体，其过程如图所示，回答下列问题：
注：图中“→”表示PCR 引物；条纹或颜色相同的序列表示同源序列或相同序列；KanR表示卡那
霉素抗性基因。
(1)利用同源重组法构建基因表达载体的过程中，环状质粒经 处理后可获得线性化的质粒，
PCR 扩增目的产物片段的过程中，图中引物 的 端应含有质粒的同源序列，以便进行
同源重组。
(2)据图分析，引物F2-F 和F1-R 的碱基序列应具有的特点有 。PCR 扩增线性化质粒的过程中所
用的引物组合是 ；向PCR 产物片段和线性载体的混合体系中加入重组酶的作用可能是
。
(3)实验小组检测大肠杆菌中是否导入重组质粒时，会先挑取单个菌落，再通过热处理使细菌的细胞壁
和细胞膜裂解，并直接以菌体热解后暴露的DNA 为模板进行PCR 扩增，这种技术称为菌落PCR 技
术。与常规PCR 相比，菌落PCR 的优点和缺点是 （各列举1 例）。
【答案】(1)限制酶 F1-F 和F2-R 5'
(2)引物F2-F 和F1-R 应包含基因XDH 尾部和基因GFP 头部的碱基序列，且二者等长并反向互补 P-F
和P-R 催化目的基因片段和线性质粒片段之间发生同源重组
(3)优点：可同时对多个菌落进行鉴定，效率高；省去了提取基因组DNA 和酶切鉴定的步骤，节约了时间
和成本。缺点：模板中含有其他无关DNA 序列，可能导致非特异性扩增；菌体可能热解不完全，部分
DNA 未充分暴露影响扩增效果；菌体热解后可能存在抑制PCR 反应的物质
【来源】2025 届天一小高考高三下学期第三次考试（二模）生物试题
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩
增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动
子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。
（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）环状质粒经限制酶处理后会被切割开，从而可获得线性化质粒。因为DNA 聚合酶是向引物
的3'端添加脱氧核苷酸的，故PCR 过程中，引物F1-F 和F2-R 的5'端应含有质粒的同源序列。
（2）分析图示，引物F2-F 和F1-R 用于基因XDH 和基因GFP 的融合扩增，故引物F2-F 和F1-R 应包含基
因XDH 尾部和GFP 头部的碱基序列，且二者等长并反向互补。若要扩增线性化质粒，则需用的引物组合
是P-F 和P-R。在PCR 体系中加入重组酶的作用是催化目的基因片段和线性质粒片段的同源重组，形成重
组质粒。
（3）菌落PCR 技术是利用菌体热解暴露的DNA 为模板进行PCR 扩增，因此可同时对多个菌落进行鉴定，
效率高，且省去了提取基因组DNA 和酶切鉴定的步骤，节约了时间和成本。但也可能存在模板含无关
DNA 序列导致非特异性扩增、菌体热解不完全影响扩增效果、菌体热解产生抑制PCR 反应的物质等问题。
7．(24-25 高三下·河南新乡·二模)培育稳定且抗病能力强的番茄新品种是稳产高产的重要途径。番茄代谢产
生的H2O2是一种重要的抗病信号分子，可被体内的过氧化氢酶清除。现采用CRISPR/Cas9 基因编辑技
术敲除番茄过氧化氢酶基因，过程如图1 所示。获取的突变体可作为分析番茄的抗病性和产量的遗传
材料。回答下列问题：
(1)常用PCR 快速扩增目的基因，PCR 反应体系需含 （至少答2 种）等成分。常采用
来鉴定PCR 的产物。
(2)CRISPR/Cas9 由gRNA 和Cas9 蛋白两大部分组成，gRNA 由crRNA 和tracrRNA 组成，其中crRNA
约有20 个碱基，含有与靶基因片段配对的序列，能引导Cas9 切开靶基因所在双链DNA，随后细胞
中的酶将断裂上下游两端的序列连接起来，实现对基因的编辑。番茄过氧化氢酶基因CRISPR/Cas9
敲除突变体载体构建过程如图2 所示，其中“某序列”是指 。为了确保“某序列”能正
确连接到Ti 质粒上，相应的限制酶识别序列和切割位点如表所示，需在“某序列”的引物1 的5′端
加上碱基序列 ，引物2 的5′端加上碱基序列 。
限制酶
识别序列和切割位点
BglⅡ
5′A↓GATCT3′
NheⅠ
5′G↓CTAGC3′
(3)制备过程中利用了农杆菌Ti 质粒的T-DNA，原因是T-DNA 具有 的特点。
(4)植物组织培养常用MS 培养基，该培养基中加入适量的蔗糖的作用是 。可在MS 培养基中
添加 （填激素及比例）用于诱导愈伤组织。
【答案】(1)引物、Taq 酶、dNTP、模板 DNA 琼脂糖凝胶电泳
(2)与靶基因片段配对的序列 5′AGATCT3′ 5′GCTAGC3′
(3)可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体 DNA 上
(4)作为碳源、调节渗透压 生长素和细胞分裂素，比例适中
【来源】河南省新乡市2024-2025 学年高三下学期4 月第二次模拟考试生物试题
【分析】基因工程的基本操作步骤是获取目的基因、将目的基因导入受体细胞、筛选还有目的基因的受体
细胞、目的基因的表达与检测。
【详解】（1）PCR 反应体系一般包含引物、Taq 酶、dNTP（脱氧核苷酸）、模板 DNA 等成分。 鉴定
PCR 的产物常采用琼脂糖凝胶电泳的方法。因为不同长度的 DNA 片段在凝胶中的迁移速率不同，从而
可以根据条带的位置等判断 PCR 产物的情况。
（2）由图及相关知识可知，要使 Cas9 对靶基因所在双链进行切割，gRNA 中的 crRNA 与靶基因片段配
对后才能引导 Cas9 起作用，所以“某序列”指与靶基因片段配对的序列。 某序列的转录模板是上面的
一条链，从图中及限制酶识别序列的特点来看，BglⅡ识别序列为5′AGATCT3′，NheⅠ的酶切位点是
5′GCTAGC3′，为了确保“某序列”能正确连接到 T - 载体上，需要产生相同的黏性末端。根据碱基互补
配对原则，应在引物1 的5'端加上碱基序列 5′AGATCT3′，引物2 的5′端加上碱基序列为5′GCTAGC3′。
（3）Ti 质粒具有可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体 DNA 上的特点，所以利用农杆菌中 Ti
质粒的 T - DNA 可以将目的基因整合到受体细胞染色体 DNA 上。
（4）在植物组织培养的 MS 培养基中，加入适量的蔗糖，一是可以作为碳源，为植物组织细胞的生长提
供能量；二是可以调节培养基的渗透压，维持细胞正常的形态和生理功能。在 MS 培养基中添加生长素
和细胞分裂素，当生长素与细胞分裂素的比例适中时，有利于诱导形成愈伤组织。
8．(24-25 高三下·河南安阳·二模)科研人员常利用λ-Red 同源重组酶系统进行基因敲除、敲入等操作，其原
理是λ-Red 同源重组酶系统将一段携带同源序列的标记基因与特定靶序列进行同源重组，使靶基因被
标记基因置换下来，如图所示。回答下列问题：
(1)将pKD46 载体导入大肠杆菌时需用 Ca2+处理大肠杆菌，目的是 。检测大肠杆
菌是否含有pKD46 载体时，可依据pKD46 载体中的 的特性。
(2)PCR 时，HA1 和HA2 是依据 （填“靶基因”或“NPTⅡ”）两侧的碱基序列而设计的。
(3)与构建基因表达载体相似，λ-Red 同源重组酶系统可将标记基因插入特定 DNA 片段中。据图分析，
二者的不同之处是 。
(4)检测靶基因是否敲除成功时，科研人员采取了以下两种方法：
PCR
①
。提取过程Ⅱ处理后大肠杆菌中的 DNA 分子，依据靶基因的序列设计引物进行PCR，用
方法检测 PCR 结果，若 ，则说明基因敲除成功。
②培养基培养。从培养基成分角度，简要描述检测思路： 。
【答案】(1)使大肠杆菌处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态 标记基因
(2)靶基因
(3)λ-Red 同源重组酶系统不需要限制酶和 DNA 连接酶
(4)琼脂糖凝胶电泳 无电泳条带 用含卡那霉素的培养基培养大肠杆菌，若培养基上有菌落生长，
则说明基因敲除成功
【来源】河南省安阳市2025 届高三下学期第二次模拟考试生物试题
【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞
的方法有农杆菌转化法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细
胞的方法是感受态细胞法。
【详解】（1）将重组质粒导入微生物（如大肠杆菌）时，需先用Ca²⁺处理，其目的是使受体菌处于一种
能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态。重组质粒pKD46 中的标记基因可用于重组质粒的筛选与鉴定，
因此检测大肠杆菌是否含有pKD46 载体时，可依据pKD46 载体中的标记基因的特性。
（2）为使NPTⅡ与靶基因发生同源重组，HAl 和HA2 应是依据靶基因两侧的碱基序列设计的。
（3）构建基因表达载体需要使用限制酶（切割目的基因和质粒）和DNA 连接酶（连接目的基因和质粒），
而图中同源重组酶系统不需要使用这两种酶。
（4）若敲除成功，则NPTⅡ替代了靶基因，依据靶基因的序列设计引物进行PCR，用琼脂糖凝胶电泳检
测 PCR 的产物，若没有出现相应条带则说明敲除成功。用培养基培养，若敲除成功，则大肠杆菌应出现
抗卡那霉素的特性，若含卡那霉素的培养基上有菌落生长，则说明基因敲除成功。
9．(24-25 高三下·河南湘豫联考·二模)科研人员根据获得的红花转录因子基因（CtWRI1）的cDNA 序列设
计引物，通过PCR 获得CtWRI1 编码序列，并通过烟草遗传转化对其功能进行研究。图甲为实验过程
中使用的Ti 质粒图谱及T-DNA 结构，其中Rifr代表利福平抗性基因，bar 代表除草剂抗性基因，LB 和
RB 分别代表T-DNA 的左边界和右边界。图乙为不同限制酶的酶切序列和CtWRI1 的结构及转录方向。
回答下列问题：
(1)为了将CtWRI1 编码序列与图甲中的Ti 质粒正确连接，构建引物F 和引物R 时应在 端分别
添加 的识别序列，通过酶切和连接后可获得连接产物。
(2)CtWRIl 转录的模板链的序列为：5'-TTAGCCT……TACCGACAT-3'，请写出引物R 的前10 位碱基序
列：：5'- -3'。
(3)通过 法将CtWRII 编码序列导入烟草细胞，利用含 的培养基对烟草细胞进行初步筛
选，再通过 技术获得转基因烟草。可以通过 等技术从分子水平上检测烟草细胞的
染色体DNA 上是否插入了CtWRI1 编码序列。
(4)科研人员测定野生型烟草（WT）和转基因烟草中CtWRI1 的相对表达量、脂肪酸合成基因的相对表
达量和种子含油量，结果见图丙。据图丙分析，转基因烟草种子含油量增加的可能原因是
。
【答案】(1)5' SacⅠ和Pst Ⅰ
(2)CTGCAGTTAG
(3)农杆菌转化 除草剂 植物组织培养 PCR
(4)CtWRI1 的过量表达促进了脂肪酸合成相关基因的表达，进而促进了油脂的合成
【来源】2025 届湘豫名校联考高三第二次模拟生物试题
【分析】基因工程的基本操作程序包括：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细
胞、目的基因的检测和表达。
（1）提取目的基因：获取目的基因是实施基因工程的第一步。如植物的抗病（抗病毒 抗细菌）基因，种
子的贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因干扰素基因等，都是目的基因；
（2）目的基因与运载体结合：基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二
步，也是基因工程的核心；
（3）将目的基因导入受体细胞：将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。目的基因的片段与
运载体在生物体外连接形成重组DNA 分子后，下一步是将重组DNA 分子引入受体细胞中进行扩增；
（4）目的基因的检测和表达：目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通
过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。
【详解】（1）引物设计时，应在5'端添加限制酶识别序列，因为DNA 聚合酶只能从引物的3'端开始延伸
子链，所以要将限制酶识别序列添加在5'端，便于后续的酶切和连接操作；由图甲中T - DNA 结构可知，
在启动子2 和终止子之间有多个限制酶酶切位点，为保证CtWRI1 编码序列能正确插入且不破坏其他重要
元件，同时考虑到限制酶切割后的黏性末端能正确连接，结合图乙中CtWRI1 的结构及转录方向，应在引
物F 和引物R 的5'端分别添加SacⅠ和Pst Ⅰ的识别序列。这样切割后产生的黏性末端可以正确连接，构建基
因表达载体；
（2）已知CtWRIl 转录的模板链的序列为：5'-TTAGCCT……TACCGACAT - 3'，转录是从DNA 模板链的
3'端向5'端进行，而引物R 与模板链的3'端互补配对，所以引物R 的前10 位碱基序列与模板链从3'端开始
的前10 个碱基互补。需要在5'端添加限制酶PstⅠ的识别序列，所以引物R 的前10 位碱基序列为5'-
CTGCAGTTAG - 3'；
（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，本题中将CtWRII 编码序列导入烟草细胞也可通过农杆
菌转化法。因为Ti 质粒可以整合到植物细胞的染色体DNA 上，从而将目的基因导入受体细胞；由图甲可
知，Ti 质粒上含有bar 代表的除草剂抗性基因，所以利用含除草剂的培养基对烟草细胞进行初步筛选，能
够在该培养基上存活的细胞可能含有重组Ti 质粒，即可能导入了CtWRII 编码序列；将导入目的基因的烟
草细胞培养成完整的转基因烟草植株，需要通过植物组织培养技术，利用植物细胞的全能性，将单个细胞
培养成完整植株；从分子水平上检测烟草细胞的染色体DNA 上是否插入了CtWRI1 编码序列，可采用
PCR 技术从分子水平上检测烟草细胞的染色体DNA 上是否插入了CtWRI1 编码序列；
（4）据图丙分析，转基因烟草中CtWRI1 的相对表达量高于野生型烟草，同时脂肪酸合成基因的相对表达
量也高于野生型烟草，而种子含油量转基因烟草也高于野生型烟草。所以转基因烟草种子含油量增加的可
能原因是CtWRI1 的过量表达促进了脂肪酸合成相关基因的表达，进而促进了油脂的合成，最终导致种子
含油量增加。
10．(24-25 高三下·河南郑州·二模)棉花是重要的经济作物，但其生长易受杂草和棉铃虫的侵害，从而造成
减产。科学家成功构建了抗除草剂和抗虫双价植物表达载体pBI121-Bar/Bt（pBI121 是Ti 质粒，Bar 是
抗除草剂基因，Bt 是抗虫基因），构建过程如下图所示，并通过农杆菌转化法获得了具有两种抗性的
转基因棉花。请回答相关问题。
(1)Ti 质粒pBI121 中的35S 序列属于 （填“启动子”或“终止子”），它的作用是 。据
图分析，Bar 基因插入MCS 序列后，以 （填“α”或“β”）链为模板进行转录。
(2)请仿照图例在下图合适位置中标出MCS 序列被酶切后产生的切口，以保证能成功构建重组质粒
pBI121-Bar 。
(3)检测pBI121-Bar 是否重组成功，通常要用到大肠杆菌，经Ca2+诱导后使其处于能 的状态，
筛选时需向培养基中额外添加 （填物质名称），然后挑选平板上生长的单菌落，利用Bar 基
因两端序列制作的引物进行PCR，并采用 来鉴定PCR 的产物。
(4)pBI121-Bar 与Bt-4AB 成功重组后，需导入农杆菌LBA4404 中，该农杆菌含Vir 基因，酚类物质可以
诱导其表达。Vir 基因表达的产物能识别Ti 质粒的LB/RB 序列，水解 （填化学键）将T-
DNA 剪切下来。
(5)农杆菌与棉花愈伤组织共培养时，T-DNA 发生转移并整合到 。个体水平上检测时，可通过
来确定棉花是否具有抗性及抗性程度。
【答案】(1)启动子 RNA 聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA α
(2)如下图
(3)吸收周围环境中的DNA 分子 卡那霉素 琼脂糖凝胶电泳
(4)磷酸二酯键
(5)棉花细胞染色体DNA 使用棉铃虫和除草剂处理转基因棉花
【来源】2025 届河南省郑州市高三下学期第二次质量检查生物试题
【分析】基因工程的基本操作程序包括：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细
胞、目的基因的检测和表达。
（1）提取目的基因：获取目的基因是实施基因工程的第一步。如植物的抗病（抗病毒 抗细菌）基因，种
子的贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因干扰素基因等，都是目的基因；
（2）目的基因与运载体结合：基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二
步，也是基因工程的核心；
（3）将目的基因导入受体细胞：将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。目的基因的片段与
运载体在生物体外连接形成重组DNA 分子后，下一步是将重组DNA 分子引入受体细胞中进行扩增；
（4）目的基因的检测和表达：目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通
过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。
【详解】（1）Ti 质粒 pBI121 中的35S 序列属于启动子。因为启动子是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，
能驱动基因转录出 mRNA，而35S 序列具有这样的功能。它的作用是RNA 聚合酶识别和结合的部位，驱
动基因转录出mRNA。观察，Bar 基因插入 MCS 序列后，以α 链为模板进行转录。因为根据转录的方向
以及基因插入的位置等可以判断出模板链；
（2）要构建重组质粒pBI121 - Bar，需用EcoR I 和BamH I 切割。EcoR I 识别序列为5'-G↓AATTC - 3'，
BamH I 识别序列为5'-G↓GATCC - 3'。在给定的DNA 序列中： 对于5'-GAATTCCTCGAGGG
TACCTCTAGACTGCAGGCATGCGGATCC - 3'，在GAATTC 处，5'端切割后为5'-G - 3'，3'端为5'-
AATTCCTCGAGGG TACCTCTAGACTGCAGGCATGCGGATCC - 3'；在GATCC 处，5'端切割后为5'-G -
3'，3'端为5'-ATCC - 3'。 对于3'-CTTAAGGAGCTCCCATGGAGATCTGACG TCCGTAGGCCTAGG - 5'，
与EcoR I 识别序列互补处切割后，5'端为3'-CTTAA - 5'，3'端为3'-GGAGCTCCCATGGAGATCTGACG
TCCGTAGGCCTAGG - 5'；与BamH I 识别序列互补处切割后，5'端为3'-CCTAGG - 5' ，3'端为3'-
GTAGGC - 5' 。标注如图所示：
；
（3）经 Ca2+诱导后使其处于能吸收周围环境中 DNA 分子（感受态）的状态。这是基因工程中常用的使
微生物细胞成为感受态细胞以便吸收外源 DNA 的方法；筛选时需向培养基中额外添加卡那霉素，因为
pBI121 - Bar 质粒上含有卡那霉素抗性基因（Kan），成功导入重组质粒的大肠杆菌能在含卡那霉素的培养
基上生长；利用Bar 基因两端序列制作的引物进行PCR，并采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR 的产物。通过
电泳可以根据DNA 片段的大小和迁移速率等判断PCR 产物是否符合预期；
（4）Vir 基因表达的产物能识别 Ti 质粒的 LB/RB 序列，水解磷酸二酯键将 T - DNA 剪切下来。因为
DNA 分子中的磷酸二酯键连接着核苷酸之间的磷酸和五碳糖，要将 T - DNA 剪切下来需要破坏这种化学
键；
（5）农杆菌与棉花愈伤组织共培养时，T-DNA 发生转移并整合到棉花细胞的染色体DNA 上。个体水平上
检测时，可通过使用棉铃虫和除草剂处理转基因棉花，观察害虫的取食情况和棉花的受害情况等，来确定
棉花是否具有抗性及抗性程度。
11．(24-25 高三下·河南部分学校·二模)生长激素制剂是治疗垂体性侏儒症的特效药。人们从450 升大肠杆
菌培养液中提取的生长激素，相当于6 万头动物的全部产量。图1 是通过基因工程将人的生长激素基因
导入大肠杆菌中生产生长激素的过程，图2 是基因工程中所用到的质粒，图3 是通过PCR 获取和扩增
目的基因。请回答下列问题：
(1)图1 通过 过程得到目的基因A 后，通过③过程进行PCR 扩增。图1 中基因工程的核心步骤
是 （填序号）。
(2)若利用图3 过程获取和扩增A 基因，需要选择的一对引物是 。图3 中的基因表达时，
（填“a”或“b”）链作为转录的模板链。
(3)要使A 基因能正确与图2 中的质粒拼接在一起，需要在所选引物的 端分别增加相应的限制
酶的酶切位点。分析图2 和图3，为了防止目的基因的反向连接，可在目的基因的上、下游分别添
加 （填限制酶名称）的识别序列。
(4)科学家将A 基因与乳腺蛋白基因的启动子等重组在一起，导入性染色体组成为 的哺乳动物
受精卵中，然后将其处理并输送入受体动物体内，使其生长发育成转基因动物，若该动物
，则转基因动物培育成功。
【答案】(1)逆转录/反转录 ④
(2)引物2 和引物3 b
(3)5' AluI、HindII
(4)XX 乳腺中可表达出生长激素
【来源】河南省部分学校2024-2025 学年高三下学期3 月联考（二模）生物试题
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩
增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动
子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。
（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）由RNA→DNA 的过程是逆转录过程，故图1 中的目的基因是由mRNA 经过逆转录过程获得
的；图1 中基因工程的核心步骤是过程④基因表达载体的构建。
（2）DNA 分子中，游离的磷酸端是5'端，游离的羟基端是3'端，由于需要在引物的3'端延伸子链，因此
选择引物2 和引物3；转录过程中，mRNA 的延伸方向为5′一3'，DNA 中模板链的方向与之相反，因此图
3 中的基因表达时b 链作为转录的模板链。
（3）由于子链沿着5’→3'的方向延伸，为保证准确复制，需要在所选引物的5′端分别增加相应的限制酶的
酶切位点；转录方向是向右的，所以基因A 在连接图2 载体时，上游应靠近启动子，下游靠近终止子，而
图2 中不能选EcoRI 酶切割质粒，会破坏复制原点，为了防止目的基因的反向连接，所以应该在目的基因
上游添加AluI 酶识别序列，下游添加HindII 酶识别序列。
（4）目的基因要只在乳腺细胞表达，需要将基因A 与乳腺蛋白基因的启动子等重组在一起，导入性染色
体组成为XX（雌性的性染色体组成）的哺乳动物受精卵中，然后将其处理并输送入受体动物体内，使其
生长发育成转基因动物，若该动物乳腺中可表达出生长激素，则转基因动物培育成功。
12．(24-25 高三下·河南开封·二模)出地盐碱化是农业生态环境退化的重大问题之一。选育耐盐碱的优良品
种可以保鞭国家粮食安全、提高土地利用效率和促进农业可持续发展、研究人员尝试将OsCYP2 耐盐
基因导入水稻中，以开发耐盐水稻新品种。回答下列问题。
(1)在本研究中，OsCYP2 耐盐基因属于 ，获得后可通过 技术进行扩增。
限制酶
识别序列
BamHⅠ
5'-G↓GATCC-3'
XhoⅠ
5'-G↓TCGAG-3'
PstⅠ
5'-G↓TGCAG-3'
EcoRⅠ
5'-G↓AATTC-3'
SalⅠ
5'-G↓TCGAC-3'
(2)已知OsCYP2 耐盐基因的模板链为甲链，构建基因表达载体时，为了保证OsCYP2 耐盐基因与Ti 质
粒进行正确的拼接，需要用 酶处理OsCYP2 耐盐基因，用 酶处理Ti 质粒，再用DNA
连接酶连接。
(3)利用Ti 质粒将OsCYP2 耐盐基因导入水稻细胞的方法是 。
(4)检测OsCYP2 耐盐基因在水稻细胞中是否稳定存在时，可用重组酶聚合酶扩增技术（简称RPA）进
行检测。RPA 技术主要依赖重组酶uvsX、单链结合蛋白Gp32、链置换DNA 聚合酶Bsu，其中重组
酶uvsX 能够在37℃-42℃时解开双链DNA．RPA 反应开始的时候，重组酶uvsX 结合单链DNA（引
物），形成核酸蛋白复合体，这些复合体能够扫描（识别）与引物序列互补的目标双链DNA．接着，
核酸蛋白复合体侵入
端位点使DNA 双链打开。单链结合蛋白Gp32 与被置换单链结合使其稳定。
同时，重组酶uvsX 离开寡核苷酸的3'端，降解后被DNA 聚合酶利用。之后，链置换DNA 聚合酶
Bsu 结合在核酸蛋白复合体的游离3'端，进行子链延伸。以上步骤循环进行，就可以实现DNA 的指
数增长。其过程如图所示。
①用RPA 技术检测时，引物应与 相同。
②相对于PCR 而言，RPA 技术具有 、仪器依赖性低等突出优点，利于现场检测和即时诊断。
③通过优化 ，可以进一步提高RPA 技术的特异性和灵敏性。
【答案】(1)目的基因 PCR
(2)Pst Ⅰ和Sal Ⅰ Xho Ⅰ和Pst Ⅰ
(3)农杆菌转化法
(4)OsCYP2 耐盐基因两侧的特异性碱基序列 反应条件温和 引物设计和反应条件
【来源】2025 届河南省开封市等3 地高三下学期二模生物试题
【分析】目的基因的检测与鉴定：分子水平检测目的基因是否插入转基因生物的DNA 用PCR 技术；检测
目的基因是否转录出了mRNA 用PCR 技术；检测目的基因是否翻译出蛋白质用抗原-抗体杂交，个体水平
检测目的是否表现出相应的特性。
【详解】（1）在基因工程中，目的基因是指人们想要研究或利用的基因，本题中要将OsCYP2 耐盐基因
导入水稻中，所以OsCYP2 耐盐基因属于目的基因。而获得目的基因后，可通过 PCR（聚合酶链式反应）
技术进行扩增，PCR 技术能在体外快速大量扩增特定 DNA 片段。
（2）已知OsCYP2 耐盐基因的模板链为甲链，构建基因表达载体时，为保证目的基因与载体正确拼接，
需要用限制酶切割目的基因和载体，使其产生相同的黏性末端或平末端。根据图中限制酶的识别序列可知，
Xho Ⅰ和Sal Ⅰ 切割后产生的粘性末端相同，且要把目的基因插入到T-DNA 上，要保证拼接正确，需要用
Xho Ⅰ和Pst Ⅰ酶处理Ti 质粒，用Pst Ⅰ和Sal Ⅰ处理OsCYP2 耐盐基因，再用DNA 连接酶连接。
（3）利用Ti 质粒将OsCYP2 耐盐基因导入水稻细胞的方法是农杆菌转化法。
（4）①用RPA 技术检测时，引物的作用是与目标DNA 序列结合，以便后续进行DNA 的扩增等操作，所
以引物应与目的基因OsCYP2 耐盐基因两侧的特异性碱基序列相同，才能准确识别并结合到目标双链
DNA 上，从而启动后续的扩增反应。
PCR
②
技术一般需要在较高温度（如 90 - 95℃进行变性等操作），而RPA 技术在37∘C−42∘C 就能进行反应，
所以相对于PCR 而言，RPA 技术具有反应条件温和仪器依赖性低等突出优点，较低的反应温度使得其在一
些对设备要求不高的现场检测和即时诊断场景中更具优势。
③引物的设计和反应条件对于PCR 和RPA 等扩增技术都非常关键。合适的引物可以准确地与目标 DNA
序列结合，避免非特异性扩增等问题。所以通过优化引物设计，可以进一步提高 RPA 技术的特异性和灵
敏性。引物的特异性决定了能否准确扩增目标基因，灵敏性则影响着对低浓度目标基因的检测能力。
13．(24-25 高三下·河南洛平许济·二模)我国科研人员利用多种现代生物技术，在猪的体内培育出了一个
“人-猪嵌合中期肾”，且维持到胚胎第28 天（实验过程如图1 所示），该研究实现了世界首例人源化
肾脏异种再生的壮举。回答下列问题。
(1)据图1 分析，在“人源化中肾”的培养过程中，运用了 等动物细胞工程的技术（答出3 点即
可）。
(2)过程②常用的去核方法为 ，所谓的“核”实际上是 。过程③中，获得单细胞悬液时，
猪胚胎剪碎后需用 处理。
(3)过程④运用基因编辑技术（见图2，Cas9 蛋白在向导RNA 引导下，切割目标DNA 双链）敲除成纤
维细胞中的猪肾发育的关键基因SIX1，可以为后续人iPS 细胞的生长和分化提供更合适的生存环境。
下列对于该过程的分析，正确的有 。
A．Cas9 蛋白由相关基因指导在核糖体上合成，向导RNA 可在逆转录酶催化下合成
B．Cas9 蛋白识别并切割SIX1 基因特定位点的磷酸二酯键，其作用方式与限制酶相同
C．向导RNA 的部分序列是根据SIX1 基因设计的，其双链区遵循碱基互补配对原则
D．敲除SIX1 基因的猪胚胎可避免猪细胞与人iPS 细胞竞争肾脏发育的环境
(4)过程⑧中，选用iPS 细胞作为肾脏供体细胞的原因是 。在早期胚胎阶段，猪胚胎的细胞尚未
完全分化成各种类型的细胞和组织，细胞之间的连接较松散，这使得导入的人iPS 细胞较容易在猪
胚胎中整合，胚胎的可塑性也较强，据此判断在构建嵌合胚胎过程中，可在猪胚胎发育至
（填“桑葚胚”或“囊胚”）期注射人源供体细胞。合适的培养基是提高iPS 细胞嵌合能力的关键，
下列有关叙述错误的是 。
A．培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等营养物质
B．为保证体外培养细胞处于无菌、无毒的环境，除无菌操作外，培养液还需定期更换
C．动物细胞应放入含5%CO2培养箱中培养，CO2的主要作用是刺激细胞呼吸
D．维持动物细胞体外生存必须有适宜的温度、pH 和渗透压等环境条件
【答案】(1)动物细胞培养、细胞核移植技术、胚胎移植和干细胞培养
(2)显微操作法 MⅡ期卵母细胞中的纺锤体-染色体复合物 胰蛋白酶/胶原蛋白酶
(3)CD
(4)iPS 细胞具有与胚胎干细胞类似的分裂和分化能力，在特定条件诱导下能定向分化为特定的组织器官
桑葚胚 C
【来源】2025 届河南省豫西北教研联盟（洛平许济）高三下学期3 月二模生物试卷
【分析】细胞全能性是指已经分化的细胞，仍然具有发育成完整生物体的潜能。在多细胞生物中，每个体
细胞的细胞核都含有个体发育的全部基因，只要条件许可，都可发育成完整的个体。
诱导多能干细胞技术是指通过导入特定的转录因子将终末分化的体细胞重编程为多能性干细胞。分化的细
胞在特定条件下被逆转后，恢复到类似胚胎干细胞。分化是基因选择性表达的结果，并没有改变遗传物质，
而重编程在某种意义上就是分化的一个逆转。
【详解】（1）依据图1 可知，在“人源化中肾”的培养过程中，运用了动物细胞培养技术、细胞核移植
技术、胚胎移植技术等动物工程技术。
（2）过程②表示去除卵母细胞的细胞核，采用的方法是显微操作法，所谓的“核”实际上是指MⅡ期卵
母细胞中的纺锤体-染色体复合物。过程③中，获得单细胞悬液时，猪胚胎剪碎后，需用胰蛋白酶处理，将
组织细胞分散开。
（3）A、Cas9 蛋白是以mRNA 为模板，在核糖体上合成的，向导RNA 以DNA 为模板在RNA 聚合酶的作
用下合成，逆转录酶催化合成的是RNA
DNA 的过程，A 错误；
B、限制酶具有识别并切割特定的脱氧核糖核苷酸序列的作用，打开磷酸二酯键，Cas9 蛋白在向导RNA 引
导下，切割目标DNA 双链，说明不具有识别作用，打开的是磷酸二酯键，B 错误；
C、向导RNA 的部分序列是根据SIX1 基因设计的，其双链区遵循碱基互补配对原则，C 正确；
D、SIX1 基因是控制猪肾发育的关键基因，若不敲除，则会与人iPS 细胞竞争肾脏发育的环境，D 正确。
故选CD。
（4）之所以选用iPS 细胞作为肾脏供体细胞，主要由于iPS 细胞具有与胚胎干细胞类似的分裂和分化能力，
在特定条件诱导下能定向分化为特定的组织器官。依据题干信息，猪胚胎的细胞尚未完全分化成各种类型
的细胞和组织，细胞之间的连接较松散，这使得导入的人iPS 细胞较容易在猪胚胎中整合，所以在构建嵌
合胚胎过程中，可在猪胚胎发育至桑葚胚（分化程度较囊胚低）期注射人源供体细胞。
A、对动物细胞进行培养，培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等营养物质，A
正确；
B、为保证体外培养细胞处于无菌、无毒的环境，除无菌操作外，培养液还需定期更换，以补充营养物质，
减少细胞代谢废物的积累，B 正确；
C、CO2的主要作用是维持培养液的pH，不是刺激细胞呼吸，C 错误；
D、维持动物细胞体外生存必须有适宜的温度、pH 和渗透压等环境条件，D 正确。
故选C。
14．(24-25 高三下·河南信阳高级中学·二模)（一）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配
方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。
成分
蛋白胨
乳糖
蔗糖
K2HPO4
指示剂
琼脂
含量（g）
10.0
5.0
5.0
2.0
0.2
12.0
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
(1)若根据用途划分，该培养基属于 培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培
养基的营养成分必须怎样更改？ 。
（二）美西螈具有很强的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为
研究巨噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白CD14 的单克隆抗体，具体方法如下。
回答下列问题：
基因工程抗原的制备
(2)载体和CD14 片段的酶切位点及相应的限制酶识别序列如图1 所示。根据美西螈CD14 基因的核苷酸
序列，合成引物，利用PCR 扩增CD14 片段。用XhoI 和SalI 分别酶切CD14 和载体后连接，CD14
接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA，可进一步用这两种限制酶对CD14 的连接
方向进行鉴定，理由是 。培养能表达CD14 蛋白的大肠杆菌，分离纯化目的蛋白。
抗CD14 单克隆抗体的制备流程如图2 所示：
(3)步骤①和⑤分别向小鼠注射 和 。
(4)吸取③中的上清液到④的培养孔中，根据抗原一抗体杂交原理，需加入 进行专一抗体检测，检
测过程发现有些杂交瘤细胞不能分泌抗CD14 抗体
(5)步骤⑥从 中提取到大量的抗CD14 抗体，用于检测巨噬细胞。
【答案】(1)鉴别 将蛋白胨改成尿素
(2)正向连接的重组DNA 有这两种酶的酶切位点（限制酶的识别序列）；而反向连接的重组DNA 会形成新
的序列，没有这两种酶的酶切位点（没有限制酶的识别序列）
(3)CD14 蛋白/CD14 抗原 分泌抗CD14 抗体的杂交瘤细胞
(4)CD14 蛋白
(5)小鼠腹水
【来源】2025 届河南省信阳市浉河区信阳高级中学高三下学期二模生物试题
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免
疫的B 淋巴细胞；诱导B 细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛
选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培
养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】（1）上述培养基当中加入了指示剂，可用于大肠杆菌的鉴定，因此若根据用途划分，该培养基
属于鉴别培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，则应该以尿素为唯一氮源，而蛋白胨
中含有N，因此应该将蛋白胨改为尿素。
（2）结合图示可知，两种限制酶切割所获得的黏性末端相同，用XhoI 和SalI 分别酶切CD14 和载体后连
接，CD14 接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA，正向连接的重组DNA 有这两种酶的
酶切位点（限制酶的识别序列）；而反向连接的重组DNA 会形成新的序列，没有这两种酶的酶切位点
（没有限制酶的识别序列），因此可进一步用这两种限制酶对CD14 的连接方向进行鉴定。
（3）步骤①是注射特定抗原，诱导机体产生对应的B 细胞，针对本实验目的可知，要获得抗CD14 单克隆
抗体，故应该注射CD14 蛋白/CD14 抗原；步骤⑤是将分泌抗CD14 抗体的杂交瘤细胞注入小鼠体内培养，
以获得大量单克隆抗体。
（4）要证明吸取的③中的上清液是否含有抗CD14 蛋白的抗体，根据抗原—抗体杂交原理，应该用CD14
蛋白检测其中是否含抗CD14 蛋白的抗体。
（5）从制备单克隆抗体的流程可知，将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔后，最终要从小鼠的腹水中提取抗
CD14 抗体。
