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专题强化练
[分值：100 分]
1～10 题每题5 分，11～12 题每题6 分，共62 分
一、选择题(每小题只有一个选项符合题目要求。)
1．(2025·青岛二模)普通水稻含铁量极低，研究人员通过改良相关基因，培育出了铁含量比
普通水稻高60%的转基因水稻。图1 为改良基因及Ti 质粒的示意图，该质粒含有氨苄青霉
素抗性基因、LacZ 基因及一些酶切位点，图2 为后续培养过程。下列叙述正确的是( )
A．需用限制酶Xma Ⅰ和Nhe Ⅰ对Ti 质粒进行切割
B．培养基2 与培养基3 加入的生长素和细胞分裂素比例不同
C．在含氨苄青霉素的培养基中能够生长的农杆菌细胞中一定含有改良基因
D．筛选含重组质粒的农杆菌时，应该在培养基中加入β半乳糖苷，目标菌落为蓝色
答案 B
解析 由图1 可知，改良基因的左侧和右侧分别是用限制酶Xma Ⅰ和Bgl Ⅱ切割后产生的
黏性末端，因此将改良基因和Ti 质粒连接时，需用限制酶Xma Ⅰ和Bgl Ⅱ对Ti 质粒进行
切割，以便产生与改良基因两端相同的黏性末端，A 错误；图2 中愈伤组织经再分化过程形
成转基因水稻，培养基2 与培养基3 的区别是加入的生长素和细胞分裂素比例不同，B 正确；
在含氨苄青霉素的培养基中能够生长的农杆菌细胞中不一定含有改良基因，原因是若农杆菌
细胞中导入的是未携带改良基因的质粒，其含有氨苄青霉素抗性基因，也能在含氨苄青霉素
的培养基中生长，C 错误；LacZ 基因编码产生的酶能分解β半乳糖苷，产生蓝色物质，使菌
落呈现蓝色，否则菌落为白色。构建重组质粒时，LacZ 基因的结构被破坏，含重组质粒的
农杆菌不能分解β半乳糖苷，菌落为白色。可见，筛选含重组质粒的农杆菌时，应该在培养
基中加入β半乳糖苷，目标菌落为白色，D 错误。
2．(2025·安徽，15)质粒K 中含有β半乳糖苷酶基因，将该质粒导入大肠杆菌细胞后，其编
码的酶可分解X－gal，产生蓝色物质，进而形成蓝色菌落，如图所示。科研小组以该质粒
作为载体，采用基因工程技术实现人源干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达。下列叙述错误
的是( )
A．使用氯化钙处理大肠杆菌以提高转化效率，可增加筛选平板上白色和蓝色菌落数
B．如果筛选平板中仅含卡那霉素，生长出的白色菌落不可判定为含目的基因的菌株
C．因质粒K 中含两个标记基因，筛选平板中长出的白色菌落即为表达目标蛋白的菌株
D．若筛选平板中蓝色菌落偏多，原因可能是质粒K 经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌
答案 C
解析 使用氯化钙处理大肠杆菌，可使其处于一种能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态，
提高转化效率，可增加筛选平板上白色和蓝色菌落数，A 正确；如果筛选平板中仅含卡那霉
素，能生长出的菌落都具有卡那霉素抗性，白色菌落可能导入了重组质粒(含目的基因)，筛
选平板因未加入X－gal 无法检验β半乳糖苷酶基因是否被破坏，也可能是导入了未重组的
质粒K，所以不可判定该白色菌落为含目的基因的菌株，B 正确；筛选平板中长出的白色菌
落，可能导入了重组质粒(含目的基因)，但导入的目的基因不一定成功表达目标蛋白，不能
仅仅因为是白色菌落就判定其为表达目标蛋白的菌株，C 错误；若筛选平板中蓝色菌落偏多，
原因可能是质粒K 经酶切后自身环化并导入了大肠杆菌，因为自身环化的质粒K 中β半乳糖
苷酶基因完整，能表达活性β半乳糖苷酶，分解X－gal 进而形成蓝色菌落，D 正确。
3．常见PCR 只能扩增两引物之间的DNA 序列，要扩增已知DNA 序列两侧的未知DNA 序
列，可用反向PCR 技术。反向PCR 技术扩增的原理如图所示。下列叙述错误的是( )
A．酶切阶段，L 中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列
B．环化阶段，可选用E.coli DNA 连接酶或T4 DNA 连接酶
C．图中引物，应选择引物1 和引物4，且二者间不能互补配对
D．PCR 扩增，将温度调至72 ℃的目的是使引物与模板链结合
答案 D
解析 在酶切阶段，已知序列L 中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列，不然会将已知
序列L 切断，造成序列识别混乱，A 正确；T4 DNA 连接酶或E.coli DNA 连接酶都可以用
来连接黏性末端，因此环化阶段，可选用E.coli DNA 连接酶或T4 DNA 连接酶，B 正确；
PCR 过程需要两种引物，能分别与目的基因两条链的3′端通过碱基互补配对结合，为保证
延伸的是已知序列两侧的未知序列，应选择引物1 和引物4，且二者间不能互补配对，C 正
确；PCR 扩增中，将温度调至72 ℃的目的是使耐高温的DNA 聚合酶发挥作用，将4 种脱
氧核苷酸根据碱基互补配对原则合成新的DNA 链，D 错误。
4．PM 是一种致病真菌，其致病性可能与SKN7 基因有关。科研人员将SKN7 基因与
pMD18T 载体进行拼接后导入受体菌，以便研究SKN7 基因的功能。在SKN7 基因扩增过程
中Taq 酶会在序列3′端额外加入一个碱基A，选用限制酶甲(三种限制酶的酶切位点如图所
示)对pMD18－T 载体进行酶切，使用末端转移酶处理，在切口处加入一个碱基T，用乙酶
就能将SKN7 基因与载体连接起来，操作过程如图所示，下列叙述正确的是( )
A．构建重组质粒过程中所用到的甲酶为EcoR Ⅴ，乙酶为DNA 连接酶
B．上述方法构建重组质粒的过程中，可能会导致SKN7 基因或载体的自身环化
C．在含氨苄青霉素和X－Gal 的培养基上培养受体菌，含重组质粒的菌落呈蓝色
D．正确连接的重组质粒可被甲酶酶切，而反向连接的重组质粒不可被甲酶酶切
答案 A
解析 依据题干信息，选用限制酶甲对pMD18－T 载体进行酶切，使用末端转移酶处理，
在切口处加入一个碱基T，结合题图可知，限制酶甲产生的末端是平末端，应为EcoR Ⅴ，
乙酶能将SKN7 基因与载体连接起来，说明乙酶为DNA 连接酶，A 正确；据图可知，质粒
和SKN7 产生的末端碱基不互补，所以不易导致SKN7 基因或载体发生自身环化，B 错误；
当lac－Z 基因被破坏时，重组质粒不会编码相应的酶分解X－Gal 进而产生蓝色物质，所以
在含氨苄青霉素和X－Gal 的培养基上培养受体菌，含重组质粒的菌落呈现的是白色，C 错
误；由于EcoR Ⅴ产生的末端为平末端，缺乏定向性，所以正确连接的重组质粒可被甲酶
酶切，而反向连接的重组质粒也可被甲酶酶切，D 错误。
5．某小组通过PCR(假设引物长度为8 个碱基短于实际长度)获得了含有目的基因的DNA 片
段，并用限制酶进行酶切(如图)，再用所得片段成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的
是( )
A．酶切片段和载体连接时，可使用E.coli DNA 连接酶或T4 DNA 连接酶
B．其中一个引物序列为5′－TGCGCAGT－3′
C．用步骤①的酶对载体进行酶切，至少获得了2 个片段
D．步骤①所用的酶是Spe Ⅰ和Cfo Ⅰ
答案 D
解析 图中形成的是黏性末端，E.coli DNA 连接酶和T4 DNA 连接酶都可连接黏性末端，A
正确；由于引物只能引导子链从5′到3′延伸，且引物与模板链的3′端互补，根据碱基
互补配对原则，其中一个引物序列为5′－TGCGCAGT－3′，B 正确；用步骤①的酶对载
体进行酶切，根据三种酶的酶切位点，左侧的黏性末端是使用Nhe Ⅰ切割形成的，右边的
黏性末端是用Cfo Ⅰ切割形成的，根据它们的识别位点以及原本DNA 的序列，切割之后至
少获得了2 个片段，C 正确，D 错误。
6．在基因工程中，被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。某进行
改造后的质粒如图所示。以限制酶(酶1、酶2、酶3 和酶4)、DNA 连接酶为工具，将目的
基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载
体，并转化到受体菌中。下列叙述错误的是( )
A．若质粒和目的基因都用酶1 切割，用T4 DNA 连接酶连接的效率高于E.coli DNA 连接酶
B．若质粒和目的基因都用酶2 和酶4 切割，重组质粒中的目的基因转录的产物可能不同
C．若质粒和目的基因都用酶3 和酶4 切割，能在含氯霉素的培养基上存活的细菌中含有目
的基因
D．与用酶3 和酶4 处理相比，用酶1 和酶4 处理形成的重组质粒更容易转化到受体菌中
答案 C
解析 酶1 切割质粒和目的基因产生的DNA 片段末端为平末端，T4 DNA 连接酶连接双链
DNA 片段平末端的效率比E.coli DNA 连接酶高，A 正确。酶2 和酶4 切割质粒和目的基因
产生的黏性末端相同，在DNA 连接酶的作用下形成重组质粒时，目的基因可能倒接在质粒
上，导致转录产物不同，B 正确。若质粒和目的基因都用酶3 和酶4 切割，可以形成含有目
的基因的重组质粒；在导入受体细胞时，导入的可能是重组质粒，也可能是不含目的基因的
质粒，含有这两种质粒的受体菌均能在含氯霉素的培养基中生长，C 错误。与用酶3 和酶4
处理相比，用酶1 和酶4 处理质粒和目的基因形成的重组质粒更短，更容易转化到受体菌中，
D 正确。
7．胰岛素可以用于治疗糖尿病，但是胰岛素被注射到人体后，会堆积在皮下，并且要经过
较长时间才能进入血液，而进入血液的胰岛素又容易被分解，因此，治疗效果受到影响。如
图是用蛋白质工程设计速效胰岛素的生产过程，据图分析，下列叙述错误的是( )
A．图中各项技术并没有涉及基因工程技术
B．图中改造胰岛素结构的实质是改造胰岛素基因的结构
C．图中构建新的胰岛素模型的主要依据是蛋白质的预期功能
D．图中新的胰岛素基因必须插入质粒上的启动子和终止子之间才能表达
答案 A
解析 图中“新的胰岛素基因→在大肠杆菌或其他细胞中表达”涉及基因工程技术(将外源
基因导入受体细胞并表达)，A 错误；蛋白质工程的实质是改造基因的结构，因为蛋白质的
结构由基因决定，改造胰岛素结构需通过改造胰岛素基因来实现，B 正确；蛋白质工程中，
构建新的胰岛素模型(设计蛋白质结构)的主要依据是蛋白质的预期功能，即根据想要的功能
来设计结构，C 正确；基因表达需要启动子(启动转录)和终止子(终止转录)，新的胰岛素基
因必须插入质粒上的启动子和终止子之间，才能在受体细胞中进行转录和翻译，实现表达，
D 正确。
8．(2025·日照三模)提取细菌中质粒时常通过调节pH 使DNA 先变性再复性。拟核DNA 分
子因无法复性与其他较大的分子沉淀下来，质粒可以复性与其他小的核酸分子留在上清液中。
下列叙述正确的是( )
A．实验中可将细菌置于无菌水中使其裂解，释放DNA 分子
B．可通过调节温度来替代调节pH 使DNA 先变性再复性
C．实验中可在上清液中加入2 mol/L 的NaCl 溶液析出质粒
D．电泳分离质粒时，条带迁移速率与质粒大小和构象等因素有关
答案 D
解析 细菌有细胞壁的保护，加入适量无菌水不能使细菌裂解，通常采用加入溶菌酶等方法
使细菌裂解，A 错误；DNA 的变性和复性可通过高温(如PCR)实现，但调节温度无法实现
拟核DNA 与质粒DNA 的高效选择性分离，B 错误；析出质粒需加入冷酒精以降低DNA 溶
解度，而非高浓度NaCl(2 mol/L NaCl 会提高DNA 溶解度)，C 错误。
二、选择题(每小题有一个或多个选项符合题目要求。)
9．(2025·江苏，19)如图为人体正常基因A 突变为致病基因a 及Hind Ⅲ切割位点。Alu Ⅰ
限制酶识别序列及切割位点为
，下列叙述正确的有( )
A．基因A 突变为基因a 是一种碱基增添的突变
B．用两种限制酶分别酶切基因A 后，形成的末端类型不同
C．用两种限制酶分别酶切基因a 后，产生的片段大小一致
D．产前诊断时，该致病基因可选用Hind Ⅲ限制酶开展酶切鉴定
答案 BD
解析 对比基因A 和基因a 的序列，基因A 中“AAGCTT”变为基因a 中“AAGCTG”，
属于碱基替换(T→G)，A 错误；Hind Ⅲ切割产生黏性末端，Alu Ⅰ切割产生平末端，二者
形成的末端类型不同，B 正确；基因a 中Hind Ⅲ有2 个切割位点，Alu Ⅰ有3 个切割位点，
用两种限制酶分别酶切基因a 后，产生的片段大小不一致，C 错误；因为正常基因A 和致病
基因a 的Hind Ⅲ切割位点不同，所以产前诊断时，该致病基因可选用Hind Ⅲ限制酶开展
酶切鉴定，D 正确。
10．(2025·枣庄一模)关于“DNA 片段的扩增及电泳鉴定”(实验1)和“DNA 的粗提取与鉴
定”(实验2)的实验操作，下列叙述错误的是( )
A．实验1 中，DNA 电泳时需要在琼脂糖熔化之后凝固之前加入核酸染料
B．实验1 中，将扩增得到的PCR 产物进行凝胶电泳，加样前应先接通电源
C．实验2 中，取洋葱研磨液的上清液，加入等体积的体积分数为70%的冷酒精后析出DNA
D．实验2 中，需先将白色丝状物溶于2 mol/L 的NaCl 溶液中，再加二苯胺试剂并进行沸水
浴，用于鉴定DNA
答案 BC
解析 DNA 电泳鉴定时需要在琼脂糖熔化之后尚未完全凝固之前加入核酸染料，预先将染
料加入凝胶中，可使电泳分离后的DNA 分子在凝胶中充分染色， A 正确；进行PCR 扩增
产物电泳时，应在加样后再接通电源，B 错误；实验2 中，取洋葱研磨液的上清液，加入等
体积的体积分数为95%的冷酒精后析出DNA，C 错误；在沸水浴的条件下， DNA 遇二苯
胺会被染成蓝色，因此实验2 中需先将白色丝状物(析出的DNA)溶于2 mol/L 的NaCl 溶液
中，再加二苯胺试剂并进行沸水浴，用于鉴定DNA，D 正确。
11．(2025·长沙三模)如图甲为培育转基因生物时选用的载体，图乙是含有目的基因的一段
DNA 序列，图中标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述正确的是( )
A．若通过PCR 技术提取该目的基因，应该选用引物a 和引物c
B．构建表达载体时应选用Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ这两种限制酶
C．图乙中一个DNA 分子在PCR 仪中经过四轮复制得到所需目的基因的分子数为8 个
D．只利用含四环素的培养基就可以直接筛选出成功导入表达载体的受体细胞
答案 ABC
解析 PCR 技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，根据引物的延伸方向，所
用的引物应为图乙中的引物a 和引物c，A 正确；根据图甲可知，BamH Ⅰ会导致两种抗性
基因都被破坏，同时为防止目的基因自身环化，则只能选Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶切
割，B 正确；图乙中一个DNA 分子在PCR 仪中经过四轮复制可得到16 个DNA 片段，其中
所需目的基因的分子数为24 －2×4＝8(个)，C 正确；由于选择Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ这两种限
制酶，破坏了氨苄青霉素抗性基因，但没有破坏四环素抗性基因，因此只用含四环素的培养
基筛选出的是含有基因表达载体或普通质粒的受体细胞，D 错误。
12．土壤农杆菌天然Ti 质粒的结构如图所示。当植物受伤后会释放酚类物质，可激活农杆
菌Vir 基因，其中Vir 基因是一组基因，可编码virA、virB、virC 等一系列对T－DNA 转移
及整合必不可少的蛋白质；冠瘿碱为农杆菌提供碳源和氮源，可诱导植物产生瘤状结构。Ti
质粒需经过改造才能广泛应用于植物基因工程，下列对于Ti 质粒功能及改造过程的推断，
不合理的是( )
A．农杆菌中的Ti 质粒作为遗传物质，侵染植物细胞时并不是整个Ti 质粒进行转移
B．当农杆菌附着在植物细胞表面后，Ti 质粒的Vir 基因便会被激活和表达，从而发挥作用
C．冠瘿碱合成基因只能在宿主植物体内表达，表达产物会被农杆菌利用
D．需要在T－DNA 区域和T－DNA 之外的区域加上不同的标记基因，为便于后续筛选
答案 B
解析 农杆菌侵染植物时，仅Ti 质粒中的 T－DNA 区域转移并整合到植物染色体，并非整
个质粒转移，A 合理；Vir 基因的激活需要植物受伤释放酚类物质，而不是农杆菌附着在植
物细胞表面就会激活，B 不合理；冠瘿碱合成基因在植物体内表达后，可诱导植物产生瘤状
结构，其产物可为农杆菌提供碳源和氮源，C 合理；需要在T－DNA 区域和T－DNA 之外
的区域加上不同的标记基因，T－DNA 区域加标记基因，筛选出T－DNA 整合到植物染色
体上的细胞，T－DNA 之外的区域加上不同的标记基因，在重组 Ti 质粒构建时，能筛选出
成功导入质粒的农杆菌，D 合理。
三、非选择题
13．(22 分)(2025·河南，21)卡拉胶是一类源于海洋红藻的大分子多糖，可被某些细菌降解为
具有多种应用前景的卡拉胶寡糖。某研究小组拟筛选具有高活性卡拉胶酶(CG)的菌种用于
生产卡拉胶寡糖。回答下列问题：
(1)选择海藻和海泥作为样本筛选卡拉胶降解菌的原因是________________________
________________________________________________________________________。
将培养后的菌液混匀并充分______，再接种至微孔板中，经培养和筛选获得了CG 活性最高
的菌种。
(2)(6 分)为构建携带cg(CG 的编码基因)的大肠杆菌表达载体(图1)，对cg 的PCR 扩增产物和
质粒进行双酶切，随后用E.coli DNA 连接酶连接。为保证连接准确性和效率，cg 转录模板
链的5′端最好含有______酶切位点。另有两组同学选用了各不相同的双酶切组合和T4
DNA 连接酶重复上述实验，获得的部分重组质粒分子大小符合预期，但均无法使用各自构
建
表
达
载
体
的
双
酶
切
组
合
进
行
切
割
，
其
原
因
是
__________________________________________
________________________________________________________________________。
限制酶的识别序列和切割位点如下：
(3)为将构建好的表达载体转入大肠杆菌，需要先用Ca2 ＋处理大肠杆菌细胞，目的是
________________________________________________________________________
______________，随后在含________和________的培养基中培养一段时间后，根据菌落周围
有无水解透明圈筛选目的菌株。
(4)(6 分)已知空间上邻近的两个半胱氨酸易形成二硫键，从而提升蛋白质的耐热性。为提高
CG 的耐热性，研究人员分析了五个氨基酸位点的空间距离和保守度(保守度值越大表明该位
点对酶的功能越关键)，如图2 所示。根据分析结果，选择第______位的氨基酸替换成半胱
氨
酸
最
合
适
，
原
因
是
_______________________________________________________________
________________________________________________________________________。
答案 (1)海藻和海泥中富含卡拉胶，在富含卡拉胶的环境中，存在能够分解卡拉胶的微生
物的可能性较大 稀释 (2)BamH Ⅰ 重组质粒连接处的序列不再是原来的限制酶识别序
列 (3)使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态 卡拉胶 四环素 (4)44
该位点的氨基酸空间上离半胱氨酸更近，容易形成二硫键，而且保守度低，替换后对酶功能
的影响较小
解析 (2)转录过程沿模板链的3′端到5′端进行，所以转录模板链的5′端为靠近终止子
的一端，由于E.coli DNA 连接酶连接平末端的效率低，因此不选用EcoR V 和Sma Ⅰ酶切，
Xba Ⅰ与Spe Ⅰ切割产生的黏性末端相同，容易自连或反向连接，切割质粒时Xba Ⅰ酶
与Spe Ⅰ酶只能选择一个，另一端需要选择BamH Ⅰ酶切，所以cg 基因转录模板链的5′
端最好含有BamH Ⅰ的酶切位点。T4 DNA 连接酶可以连接黏性末端和平末端。选择不同
的双酶切组合后，若重组质粒连接处的序列不再是原来的限制酶识别序列，会导致重组质粒
无法使用构建表达载体的双酶切组合进行切割。(3)用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，可以使细胞
处于一种能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态。为筛选出成功导入表达载体的大肠杆菌，
应在培养基中添加卡拉胶和四环素，培养一段时间后，根据菌落周围有无水解透明圈来判断。
(4)空间上相近的半胱氨酸容易形成二硫键，提升蛋白质的耐热性，第44 位赖氨酸空间上离
半胱氨酸更近，容易形成二硫键提升蛋白质的耐热性，而且保守度低，替换后对酶功能的影
响较小。
14．(16 分)(2025·陕晋宁青，21)马铃薯作为重要农作物，提高其冷耐受性可拓展优质马铃薯
的种植区域。我国科研人员发现，野生马铃薯中S 基因的表达与其冷耐受性调控有关，将该
基因导入栽培马铃薯中可显著增强其抗寒能力。回答下列问题：
(1)PCR 扩增目的基因时，需要模板DNA、引物、____________、含Mg2＋的缓冲液和耐高
温
的
DNA
聚
合
酶
。
DNA
聚
合
酶
在
PCR
的
_____________________________________________
步骤中起作用。
(2)图中标识了载体和S 基因中限制酶的切割位点。为将S 基因正确插入载体，PCR 扩增S
基因时需在引物的____________(填“5′端”或“3′端”)添加限制酶识别序列，结合上表
分析，上游引物应添加的碱基序列是5′－____________－3′，切割载体时应选用的两种
限制酶是____________，PCR 扩增产物和载体分别被限制酶切割后，经纯化和连接，获得
含S 基因的表达载体并导入农杆菌。
(3)用携带S 基因的农杆菌侵染栽培马铃薯愈伤组织时，基因表达载体中T－DNA 进入愈伤
组织细胞，将S 基因整合到____________，抗性基因____________可用于筛选成功转化的愈
伤组织。该愈伤组织经____________形成芽、根，继续培育可获得抗寒能力显著增强的马铃
薯植株。
答案 (1)4 种脱氧核苷酸 延伸 (2)5′端 AGATCT BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ (3)栽培马铃
薯愈伤组织细胞的染色体DNA 上 2 再分化
解析 (1)PCR 扩增目的基因时，需要模板DNA、引物、4 种脱氧核苷酸、含Mg2＋的缓冲液
和耐高温的DNA 聚合酶。PCR 一般分为变性、复性和延伸三步，其中DNA 聚合酶在PCR
的延伸步骤中起作用。(2)为了使目的基因能够被限制酶切割，扩增目的基因时，需要在引
物的5′端添加限制酶的识别序列。结合图表分析，在载体的启动子和终止子之间有BamH
Ⅰ、EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ的识别序列，而S 基因内部含有Xba Ⅰ、Nde Ⅰ和BamH Ⅰ的识
别序列，要用BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ或Xba Ⅰ切割载体，又不能用Xba Ⅰ、Nde Ⅰ或
BamH Ⅰ切割S 基因，再根据各种限制酶的识别序列及切割位点，可知需要用BamH Ⅰ、
EcoR Ⅰ切割载体，用BamH Ⅰ的同尾酶Bgl Ⅱ和EcoR Ⅰ切割S 基因，故PCR 扩增S 基
因时需在上游引物添加的碱基序列是5′－AGATCT－3′。(3)T－DNA 属于可转移DNA，
用携带S 基因的农杆菌侵染栽培马铃薯愈伤组织时，基因表达载体中T－DNA 进入愈伤组
织细胞，将S 基因整合到栽培马铃薯愈伤组织细胞的染色体DNA 上，抗性基因1 位于T－
DNA 外部，用于筛选含有重组载体的农杆菌，而抗性基因2 位于T－DNA 内部，可用于筛
选成功转化的愈伤组织。该愈伤组织经再分化形成芽、根，继续培育可获得抗寒能力显著增
强的马铃薯植株。
